炎癥反應(yīng)及其調(diào)控在腦動(dòng)脈瘤發(fā)病中的作用和意義.pdf

1、目的：1．觀察人腦動(dòng)脈瘤組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)改變；2．檢測(cè)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)、細(xì)胞間粘附分子．1(ICAM-1)及核轉(zhuǎn)錄因子-kappa B(NF-κ B)在人腦動(dòng)脈瘤中的表達(dá)，探討腦動(dòng)脈瘤的發(fā)病機(jī)制；3．研究MCP-1、ICAM-1和NF-κ B在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)及調(diào)控機(jī)制；4．觀察抗炎治療對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔頸總動(dòng)脈瘤的療效。 方法：1．對(duì)20例人腦動(dòng)脈瘤、6例人腹主動(dòng)脈瘤和6例正常人腦動(dòng)脈標(biāo)本進(jìn)行光鏡及電鏡觀察；

2、2．免疫組化檢測(cè)動(dòng)脈瘤壁組織中CD68(巨噬細(xì)胞分子標(biāo)記)、ICAM-1和NF-κ B的表達(dá)情況；熒光定量RT-PCR檢測(cè)動(dòng)脈瘤壁組織中MCP-1mRNA表達(dá)情況；3．通過細(xì)胞培養(yǎng)觀察IL-1 β及地塞米松(Dex)對(duì)NF-κ B、MCP-1和ICAM-1在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中表達(dá)的影響，研究NF-κ B、MCP-1和ICAM-1表達(dá)的調(diào)控機(jī)制；4．彈力蛋白酶(elastase,EA)動(dòng)脈外膜直接滴注法制作兔頸總動(dòng)脈瘤動(dòng)

3、物模型，觀察地塞米松對(duì)實(shí)驗(yàn)性兔頸總動(dòng)脈瘤的療效。 結(jié)果：1．人腦動(dòng)脈瘤光鏡下管壁變薄向外膨出，內(nèi)皮細(xì)胞空泡變性、壞死脫落，部分內(nèi)皮細(xì)胞剝離并突入管腔成游離狀，可見血栓形成和機(jī)化；內(nèi)彈力板變薄、消失或中斷；平滑肌細(xì)胞數(shù)明顯減少，部分動(dòng)脈瘤壁呈均質(zhì)狀玻璃樣變，中膜和外膜可見大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；整個(gè)動(dòng)脈壁厚薄不均，局部區(qū)域顯著變薄、擴(kuò)張。電鏡下可見瘤壁有動(dòng)脈硬化，瘤壁全層可見炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以外膜多見；浸潤(rùn)的細(xì)胞主要為巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，

4、少數(shù)為中性粒細(xì)胞；可見內(nèi)彈力板斷裂和膠原纖維溶解；2.CD68陽性細(xì)胞在腦動(dòng)脈瘤組織內(nèi)為10.05±1.79／高倍視野，在腹主動(dòng)脈瘤組織內(nèi)為11.33±1.75／高倍視野，正常腦動(dòng)脈壁內(nèi)未見CD68陽性表達(dá)；ICAM-1在腦動(dòng)脈瘤組織中的平均光密度(MD)值為0.285±0.033，在正常腦動(dòng)脈中為0.096±0.021，腦動(dòng)脈瘤組織中ICAM-1表達(dá)高于正常腦動(dòng)脈(P<0.01)；NF-κ B在腦動(dòng)脈瘤組織內(nèi)主要在血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌

5、細(xì)胞和炎性細(xì)胞中表達(dá)，其平均光密度(MDl值為0.312±0.037，而在正常腦動(dòng)脈壁內(nèi)為0.083±0.022，腦動(dòng)脈瘤組織中NF-κ B表達(dá)高于正常腦動(dòng)脈(P<0.01)；MCP-1 mRNA在20例腦動(dòng)脈瘤和6例腹主動(dòng)脈瘤患者血管壁組織內(nèi)△Ct值分別為2.30±1.32和3.00±1.27，而在6例正常腦動(dòng)脈中為5.5±1.69，動(dòng)脈瘤組織MCP-1 mRNA表達(dá)高于正常腦動(dòng)脈(P<0.01)。運(yùn)用Livak方法計(jì)算：MCP-1在

6、腦動(dòng)脈瘤和腹主動(dòng)脈瘤中的基因表達(dá)水平分別是正常腦動(dòng)脈中的9.38和5.77倍；3．在沒有外界干預(yù)的情況下，HUVEC幾乎不表達(dá)NF-κ B，但可低水平表達(dá)ICAM-1。在培養(yǎng)的HUVEC培養(yǎng)液中加入IL-1 β后4小時(shí)，NF-κ B和ICAM-1表達(dá)明顯升高，24小時(shí)達(dá)高峰并維持在較高水平。用地塞米松處理一小時(shí)后再加入IL-1 β刺激則NF-κ B和ICAM-1表達(dá)明顯抑制，且兩者表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.872，P<0.01)；MCP-1

7、在IL-1 β組和IL-1 β+Dex組中的基因表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)前沒有明顯差別，但實(shí)驗(yàn)后8小時(shí)IL-1 β組MCP-1表達(dá)升高并高于IL-1 β+Dex組(P<0.01)，24小時(shí)達(dá)高峰，32小時(shí)仍然有顯著差異，其表達(dá)水平與NF-κ B表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.881，P<0.01)；4．術(shù)后7天治療組和對(duì)照組兔頸總動(dòng)脈瘤最大直徑?jīng)]有明顯差異(P>0.05)，但術(shù)后15天治療組動(dòng)脈瘤最大直徑明顯小于對(duì)照組(P<0.01)。術(shù)后7、15天治療組

8、動(dòng)脈瘤壁炎癥和彈力纖維破壞程度較對(duì)照組為輕。對(duì)照組術(shù)后7天內(nèi)可見管壁全層有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，以外膜和血栓處為重，瘤腔內(nèi)可有血栓形成。被破壞的動(dòng)脈壁內(nèi)彈力板部分?jǐn)嗔?、溶解破壞，彈力纖維拉直，中層平滑肌變薄，肌纖維拉直。術(shù)后15天炎癥更加明顯，管壁厚薄不均，彈力纖維較術(shù)后7天破壞更加嚴(yán)重。 結(jié)論：1．腦動(dòng)脈瘤病理學(xué)改變主要是動(dòng)脈壁炎癥反應(yīng)和基質(zhì)結(jié)構(gòu)的嚴(yán)重破壞，包括動(dòng)脈壁彈力纖維破壞、膠原纖維溶解和平滑肌細(xì)胞數(shù)的減少和消失。參加炎癥反

9、應(yīng)的細(xì)胞主要是巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，推測(cè)動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)的破壞是炎癥反應(yīng)的結(jié)果。動(dòng)脈瘤組織中CD68表達(dá)顯著升高，巨噬細(xì)胞可通過分泌蛋白酶(包括MMP)的途徑破壞動(dòng)脈壁的基質(zhì)結(jié)構(gòu)如彈性蛋白和膠原蛋白，從而引起動(dòng)脈瘤的發(fā)生、發(fā)展和破裂。動(dòng)脈瘤中NF-kB和ICAM-1的高表達(dá)可通過炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)動(dòng)脈瘤的形成、發(fā)展和破裂。RT-PCR方法研究顯示：動(dòng)脈瘤組織中MCP-1 mRNA高表達(dá)和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)程度(CD68陽性表達(dá))呈正相關(guān)，表明MCP-1是巨

10、噬細(xì)胞浸潤(rùn)的主要調(diào)控因子；2．HUVEC受IL-1 β活化后高表達(dá)NF-kB、ICAM-1和MCP-1，因此血管內(nèi)皮細(xì)胞在炎癥反應(yīng)過程中通過產(chǎn)生細(xì)胞因子而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。地塞米松可抑制刪VEC表達(dá)NF-k B、ICAM-1和MCP-1。在HUVEC中，NF-kB上調(diào)ICAM-1和MCP-1的表達(dá)，從而調(diào)控血管內(nèi)皮細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)的過程；3．動(dòng)脈壁彈力纖維破壞可導(dǎo)致腦動(dòng)脈瘤形成；炎癥反應(yīng)可促進(jìn)動(dòng)脈瘤的形成過程；抗炎治療(如地塞米松治療)對(duì)實(shí)