前炎癥因子在脊髓型頸椎病發(fā)病中的作用.pdf

1、目的：頸椎病(Cervical Spondylosis，CS)是近年來(lái)研究相當(dāng)多的疾病。頸椎病的臨床表現(xiàn)具有多樣性，其分類方法也比較多，目前常用的分類方法是根據(jù)臨床表現(xiàn)，病因?qū)W等因素的不同可以把頸椎病分為脊髓型，神經(jīng)根型，椎動(dòng)脈型，混合型等多種類型。脊髓型頸椎病是由于頸椎間盤突出或者骨嵴突出壓迫脊髓而產(chǎn)生的一系列臨床癥狀和體征，其中比較明顯的包括手足無(wú)力，下肢發(fā)緊，行走不穩(wěn)，不能快走，上肢握力減退，持物易墜，四肢麻木，走路時(shí)有踩棉花感，

2、胸部有束帶感，部分病情嚴(yán)重者可以出現(xiàn)行走困難，二便失禁或者尿潴留，四肢癱瘓等。該型頸椎病與神經(jīng)根型頸椎病的主要區(qū)別要點(diǎn)在于不一定出現(xiàn)上肢的放射性神經(jīng)疼痛。頸椎病尤其是脊髓型頸椎病的病因目前公認(rèn)的根源是頸椎間盤退變后椎體間松動(dòng)，椎體緣產(chǎn)生骨贅(骨刺或者骨嵴)，或者椎間盤破裂突出等壓迫脊髓導(dǎo)致的。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)在椎間盤組織的退變過(guò)程中有患者表現(xiàn)為影像學(xué)上突出壓迫的程度比較輕，但是患者的癥狀比較重，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果已經(jīng)證實(shí)炎癥反應(yīng)可能與脊髓型

3、頸椎病的臨床表現(xiàn)有一定的關(guān)系。有作者認(rèn)為在脊髓型頸椎病發(fā)病中炎癥反應(yīng)及其相關(guān)的過(guò)程所產(chǎn)生的一系列炎癥因子可以刺激神經(jīng)根和相應(yīng)的脊髓節(jié)段，加重患者的臨床不適癥狀。但是其作用的具體的分子機(jī)制目前尚未明了。目前的研究發(fā)現(xiàn)包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TNF)-α、白細(xì)胞介素(IL)-1β、IL-6等在內(nèi)的一系列炎癥因子可以介導(dǎo)炎癥反應(yīng)，一般在炎癥反應(yīng)前期有較高水平的表達(dá)，是目前公認(rèn)的“前炎癥因子"。尤其是TNF-α目前對(duì)其的研究比較多，已經(jīng)公認(rèn)其介導(dǎo)炎癥

4、反應(yīng)的作用，而且其作用的機(jī)理研究得也比較透徹，目前已經(jīng)有相應(yīng)的細(xì)胞因子藥物制劑抗TNF-α單克隆抗體(Infliximab，英夫利昔)獲得美國(guó)食品和藥品管理局(FDA)的批準(zhǔn)用于治療包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎在內(nèi)的一些炎癥因子表達(dá)過(guò)多的疾病。其在治療椎間盤突出癥上的應(yīng)用目前國(guó)際上也有相應(yīng)的短期使用臨床療效的報(bào)道，長(zhǎng)期的報(bào)導(dǎo)未見(jiàn)。在對(duì)炎癥反應(yīng)研究較多且其在腰椎間盤突出癥中的作用已經(jīng)得到初步證實(shí)的前提下，本實(shí)驗(yàn)旨在探討包括TNF-α、IL-1β、I

5、L-6在內(nèi)的前炎癥因子在脊髓型頸椎病發(fā)病的早期變化水平，探討前炎癥因子與頸椎間盤早期退變的關(guān)系。為臨床上分析脊髓型頸椎病的病因和進(jìn)一步指導(dǎo)治療提供依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)包括兩個(gè)部分，第一部分是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，第二部分是臨床病例研究。 分述如下：第一部分：動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法：通過(guò)在SD大鼠頸椎區(qū)域注射頸椎間盤后緣的骨原蛋白(BMP)可誘導(dǎo)椎間盤及韌帶組織骨化、椎體后緣骨質(zhì)增生，并對(duì)頸脊髓造成恒定的慢性壓迫，形成脊髓型頸椎病的動(dòng)物模型。本實(shí)驗(yàn)選擇36只S

6、D大鼠按處理方法不同隨機(jī)分成2組，A組：18只為使用上述方法制作的動(dòng)物模型<'1>，B組：18只健康的與A組同樣大小，在同等條件下飼養(yǎng)情況下的大鼠，作為對(duì)照組，也分別在A組動(dòng)物造模后第4、8、16周與A組對(duì)稱性的處死動(dòng)物，處理方法同A組。使用免疫組化的方法對(duì)實(shí)驗(yàn)組織進(jìn)行處理，分析。使用北航醫(yī)學(xué)病理圖象分析軟件對(duì)免疫組化的圖像進(jìn)行定量分析。同時(shí)使用免疫組化的方法對(duì)手術(shù)中摘取的人的髓核組織進(jìn)行神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)mRNA含量的測(cè)定。

7、 結(jié)果： 1．A組動(dòng)物術(shù)后8周起出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功能減退；術(shù)后4周起出現(xiàn)椎體后緣骨質(zhì)增生，占據(jù)椎管，并出現(xiàn)不同程度的脊髓受壓變形和脫髓鞘、神經(jīng)元脫失等改變；表明術(shù)后4周脊髓型頸椎病的動(dòng)物模型已經(jīng)初步形成，而且到術(shù)后第8周的時(shí)候脊髓型頸椎病已經(jīng)發(fā)展較重。 2．免疫組化的結(jié)果顯示，TNF-α在A組的細(xì)胞中主要以成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及淋巴細(xì)胞表達(dá)為主，而且在術(shù)后第4周的時(shí)候已經(jīng)有較高水平的表達(dá)，提示在脊髓型頸椎病模型建成的早期炎癥反

8、應(yīng)的相關(guān)細(xì)胞因子就已經(jīng)產(chǎn)生了，免疫組化的定量分析的結(jié)果顯示其產(chǎn)生的水平也快接近高峰的數(shù)值。TNF-α表達(dá)陽(yáng)性的例數(shù)在術(shù)后第4周的時(shí)候是4例，術(shù)后第8周的時(shí)候陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)是6例，術(shù)后16周的時(shí)候陽(yáng)性表達(dá)的例數(shù)是6例。免疫組化北航醫(yī)學(xué)病理圖象分析軟件結(jié)果顯示A組TNF-α水平較B組增高，而且差異具有顯著性(P<0.05)。提示TNF-α作為前炎癥因子的一個(gè)重要組成成員在脊髓型頸椎病發(fā)病早期的表達(dá)中占有重要的地位，是炎癥反應(yīng)的主要部分。

9、 3．IL-1β在A組中的分布也是以成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，其中主要是淋巴細(xì)胞多見(jiàn)。在術(shù)后第4周的時(shí)候表達(dá)相對(duì)TNF-α較少，但在第8周的時(shí)候表達(dá)含量明顯增高，術(shù)后16周的時(shí)候表達(dá)含量也很高。 4．IL-6在實(shí)驗(yàn)中的A組表達(dá)分布比較多見(jiàn)，在手術(shù)的過(guò)程中有一定的作用。手術(shù)后的表達(dá)含量較對(duì)照組明顯增高，兩組之間相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異。 第二部分：臨床病例研究方法：在臨床工作中收集整理病例資料，并對(duì)其進(jìn)行歸納總結(jié)。

10、本實(shí)驗(yàn)研究主要是從2004年5月到2005年1月之間，主要以河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院脊柱外科收治的20例脊髓型頸椎病患者，這些患者在從最初出現(xiàn)不適的癥狀到就診的時(shí)間不超過(guò)1個(gè)月，收集其臨床癥狀，疾病導(dǎo)致的一系列體征，影像學(xué)檢查包括MRI和/或CT檢查的結(jié)果，并且分析其中的關(guān)系。詳細(xì)記錄此類患者的手術(shù)經(jīng)過(guò)，和手術(shù)操作的方法，同一術(shù)者按照類似的操作規(guī)程，完整的摘除并且取出的32個(gè)頸椎節(jié)段的椎間盤及其髓核組織，作為A組的病例來(lái)源。此外，對(duì)照組B組

11、選擇由于車禍或者其他原因?qū)е滤劳龅呐c同時(shí)期取自死亡時(shí)間<24 h的新鮮尸體中15個(gè)頸部椎間盤組織，作為對(duì)照組B組。將兩組收集整理的病理資料，手術(shù)中摘除的脊髓型頸椎病患者突出的頸部椎間盤組織和手術(shù)中摘取的無(wú)癥狀的椎間盤組織進(jìn)行對(duì)比研究，采用雙盲的原則，采用4％的多聚甲醛進(jìn)行固定，按照規(guī)范的免疫組化實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程對(duì)所有的椎間盤髓核組織中的部分細(xì)胞因子的含量進(jìn)行檢測(cè)，主要是觀察其中TNF-α、IL-1β、IL-6的表達(dá)陽(yáng)性例數(shù)，使用北航醫(yī)學(xué)病理

12、圖象分析軟件對(duì)免疫組化的結(jié)果進(jìn)行分析處理，比較各組病例資料在椎間盤組織中的含量表達(dá)的差異。結(jié)果： 1．實(shí)驗(yàn)組32個(gè)頸部突出椎間盤組織中,TNF-α表達(dá)陽(yáng)性分別為15例，對(duì)照組15個(gè)正常椎間盤組織中表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞較少。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果有差異性(P<0.05)。 2．實(shí)驗(yàn)組32個(gè)頸部突出椎間盤組織中，IL-1β表達(dá)陽(yáng)性分別為12例，對(duì)照組15個(gè)正常椎間盤組織中表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞較少。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果有差異性(P<0.05)。

13、 3．實(shí)驗(yàn)組32個(gè)頸部突出椎間盤組織中，IL-6表達(dá)陽(yáng)性分別為11例。對(duì)照組15個(gè)正常椎間盤組織中表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞較少。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果有差異性(P<0.05)。 4．實(shí)驗(yàn)組32個(gè)頸部突出椎間盤組織中,TNF-α、IL-1β、IL-6均有很多的陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)，而且其中12例為4種細(xì)胞因子均表達(dá)陽(yáng)性。對(duì)照組15個(gè)正常椎間盤組織中表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞較少。進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果有差異性(P<0.05)。 5．免疫組化的圖像經(jīng)過(guò)北