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文檔簡介
1、 目的:克隆,構建,鑒定人組織激肽釋放酶基因真核表達載體:探討其對腎性高血壓大鼠的降壓效應和機制。
方法:以pBluescripe Ⅱ KSKLK(+)質粒為模板,通過PCR的方法擴增出人組織激肽釋放酶基因(KLK)。將其克隆到真核表達載體pcDNA3的多克隆位點,構建成pcDNA3-KLK,進行酶切及測序鑒定。將pcDNA3-KLK質粒注入“兩腎一夾”腎性高血壓大鼠的股四頭肌內,隨后給予80V、1Hz、40ms電刺激6次,
2、用RT-PCR和Western印跡實驗檢測人KLK基因在大鼠骨骼肌內的表達。每周測量大鼠收縮壓兩次。
結果:成功構建了人重組KLK真核表達質粒pcDNA3-KLK,經測序鑒定,表明:本研究克隆的人組織激肽釋放酶基因與Genbank報告的人KLK基因序列一致,同源性為100%。
人KLK基因可以在骨骼肌中表達,并可釋放入血,明顯降低腎性高血壓大鼠的血壓,降幅達8-21mmHg,其作用至少可維持4周,較對照組有顯著性差異
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