人端粒保護(hù)蛋白1(hPOT1)表達(dá)水平減低與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生相關(guān).pdf

1、研究目的:
　　 目前關(guān)于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)制的研究有多種學(xué)說(shuō)，其中端粒學(xué)說(shuō)是近幾年分子生物學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，但關(guān)于人端粒保護(hù)蛋白1(hPOT1)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生機(jī)制關(guān)系的研究國(guó)內(nèi)外仍未見(jiàn)報(bào)道。hPOT1是唯一能夠與端粒末端單鏈DNA結(jié)合的蛋白，其在細(xì)胞分裂、調(diào)控端粒的長(zhǎng)度、端粒末端的保護(hù)、端粒酶功能的維持及染色體的穩(wěn)定等方面發(fā)揮著非常重要的作用，本研究旨在探討冠心病患者h(yuǎn)POT1表達(dá)水平的改變與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生及

2、其各易患因素之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選擇
　　 選取住院患者共79例，利用冠狀動(dòng)脈造影術(shù)，將造影結(jié)果顯示一支或以上血管直徑狹窄超過(guò)50％的患者確定為冠心病組，共有49例;將無(wú)明顯冠狀動(dòng)脈狹窄的患者確定為對(duì)照組，共有30例。兩組研究對(duì)象均統(tǒng)計(jì)身高、體重、血壓、血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等資料。
　　

3、 2.各指標(biāo)測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)
　　 入院后測(cè)量次日清晨空腹血糖、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)等與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生關(guān)系密切的指標(biāo)。于次日清晨病人清醒后且未進(jìn)行任何肢體活動(dòng)時(shí)測(cè)定兩次左上肢血壓，取收縮壓(SBP)的平均值作為血壓指標(biāo)。身高、體重的最小測(cè)量單位分別為1cm和0.5kg，按照公式體重(kg)/身高(m)2計(jì)算出體重指數(shù)。
　　 3.實(shí)驗(yàn)方法

4、
　　 提取冠心病組及對(duì)照組研究對(duì)象空腹外周靜脈血，分離出血漿及白細(xì)胞，并進(jìn)一步提取白細(xì)胞內(nèi)總蛋白和mRNA，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)測(cè)定血漿及細(xì)胞內(nèi)hPOT1水平。將mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，hPOT1的特異引物用Premer5.0設(shè)計(jì)，以β-actin基因做為內(nèi)參照，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)hPOT1的基因水平表達(dá)量。
　　 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料

5、以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（（x）±s）表示，計(jì)量資料間比較采用t檢驗(yàn);直線相關(guān)(Person相關(guān))分析用以研究?jī)勺兞恐g的相關(guān)性;多因素Logistic回歸分析（前進(jìn)法）用以研究hPOT1表達(dá)量及冠心病各危險(xiǎn)因素與冠心病發(fā)生的關(guān)系，其中各自變量進(jìn)入和剔除的概率標(biāo)準(zhǔn)分別為0.05和0.1;以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)在外周靜脈血白細(xì)胞內(nèi)檢測(cè)到hPOT1，但在血漿內(nèi)未檢測(cè)到，

6、表明在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的病理生理?xiàng)l件下，hPOT1依然主要定位于細(xì)胞內(nèi)，在細(xì)胞核內(nèi)結(jié)合于端粒末端發(fā)揮作用。
　　 2.冠心病組研究對(duì)象白細(xì)胞內(nèi)hPOT1的蛋白表達(dá)量較對(duì)照組研究對(duì)象顯著減低(P＜0.05）。
　　 3.冠心病組研究對(duì)象hPOT1 mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組研究對(duì)象顯著減低(P＜0.01)。
　　 4.直線相關(guān)分析顯示在基因及蛋白質(zhì)水平上，hPOT1的表達(dá)量與冠心病及其各易患因素均顯著相關(guān)，且均成負(fù)相

7、關(guān)（P＜0.05）;多因素Logistic回歸分析顯示hPOT1的表達(dá)水平減低促進(jìn)了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生（P＜0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1.無(wú)論從基因水平或是蛋白質(zhì)水平研究，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者h(yuǎn)POT1表達(dá)水平較健康人群表達(dá)量均顯著減低。
　　 2.hPOT1的表達(dá)水平減低與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生及其多種危險(xiǎn)因素關(guān)系十分密切。
　　 3.hPOT1的表達(dá)水平減低參與了冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過(guò)程