單芽狗脊有效部位制備工藝及質(zhì)量研究.pdf

1、本論文分為兩部分： 第一部分文獻綜述 中藥抗流感病毒研究進展，綜述了近幾年來國內(nèi)外中藥及植物藥在抗流感病毒方面的研究進展情況。對狗脊屬植物的化學(xué)成分及藥理活性研究進展進行了綜述。 第二部分實驗研究 1.單芽狗脊有效部位的提取純化工藝 采用L9(3<'4>)正交實驗，以總黃酮含量為指標(biāo)，考察了乙醇濃度、提取次數(shù)、提取時間和溶媒用量，對單芽狗脊的提取工藝進行優(yōu)化，確定最佳工藝條件為：A2濃度的乙醇提取

2、2次，每次2h，溶媒用10倍量。通過測定分析六種大孔吸附樹脂對總黃酮的吸附特性，綜合考慮多方面因素，通過A、D兩種樹脂富集有效部位。通過考察A、D兩種樹脂對總黃酮的吸附特性：上樣液濃度、上樣量、吸附流速、徑高比、除雜溶劑、除雜溶劑用量、除雜流速、洗脫溶劑、洗脫流速、洗脫體積等影響因素，確定了最佳樹脂純化工藝。三批樣品的制備和含量測定驗證結(jié)果表明該工藝合理、穩(wěn)定?？傸S酮含量約64％以上，總黃酮轉(zhuǎn)移率約51％以上，出膏率約1.27％，RSD

3、為1.28％。 2．對照品的制備 用大孔吸附樹脂、硅膠柱色譜法、聚酰胺色譜柱和反相C-18柱色譜法，從單芽狗脊中分離得到山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙酰基)鼠李糖基-7-O-α-L-廣鼠李糖苷(利用波譜法和化學(xué)法鑒定了該單體的結(jié)構(gòu))對照品45mg(經(jīng)HPLC純度測定，達(dá)到99.2％)。 3．建立了高效液相色譜法 測定單芽狗脊有效部位中山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙?；?鼠李糖基-7-O-α-L

4、-鼠李糖苷的含量測定方法。對照品山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙?；?鼠李糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷在0.1596-0.7980μg 范圍內(nèi)時，其色譜峰峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：A=58464x+34.5，r=0.9999，對照品回收率為101.62％，RSD=1.52％(n=6)。對三批單芽狗脊有效部位進行了含量測定，三批有效部位中山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙?；?鼠李糖基-7-O-α-L-廣鼠李糖苷

5、的平均含量為17.69％，RSD=1.50％(n=3)。實驗結(jié)果表明，該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠。 4.建立了高效液相色譜法 測定單芽狗脊有效部位中總黃酮含量測定的法。以山柰素為對照品，有效部位水解后用HPLC法測定黃酮苷元-山柰素的量，在通過轉(zhuǎn)化因子換算成黃酮苷的量。山柰素在0.074～0.89 μg范圍內(nèi)其色譜峰峰面積與進樣量呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為：y=3882x-4.364，r=1，對照品回收率為98.66 ％

6、，RSD=1.17％(n=6)。對三批單芽狗脊藥材、有效部位及進行了含量測定，三批單芽狗脊藥材的平均總黃酮含量為1.40％，有效部位的平均總黃酮含量為64.77％。實驗結(jié)果表明，該方法簡便、準(zhǔn)確、可靠。 5.建立了單芽狗脊有效部位的HPLC指紋圖譜檢測方法 以山柰素-3-O-α-L-(4-O-乙?；?鼠李糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷為參照物，對自制的三批單芽狗脊有效部位進行了HPLC指紋圖譜研究，建立了測定方法和指紋圖

7、譜相應(yīng)的技術(shù)參數(shù)，標(biāo)定了12個共有指紋峰，并通過與對照品對照確認(rèn)了其中的2個共有指紋峰。精密度試驗考察結(jié)果表明：各共有指紋峰相對保留時間的RSD在0.20-1.93％之間，峰面積比值的RSD在2.42-3.46％之間；穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明：供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定；重復(fù)性實驗結(jié)果表明：各共有指紋峰相對保留時間的RSD在0.23-2.13％之間，峰面積比值的RSD在2.19-3.48％之間。三批有效部位中非共有峰占總峰面積的百分比均未超過5