凝血系統(tǒng)基因相關(guān)SNPs及其單體型與長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群腦出血的關(guān)系研究.pdf

1、目的：本研究旨在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群中，按多基因復(fù)雜疾病研究策略及方案，首次同時(shí)在散發(fā)性腦出血患者與健康對(duì)照人群及有家族聚集現(xiàn)象的腦出血家系中研究凝血因子Ⅰ(coagulation factorⅠ，F(xiàn)1)基因、凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ，F(xiàn)7)基因、蛋白Z(protein Z，ProZ)基因、凝血因子Ⅻ(coagulation factorⅫ，F(xiàn)12)基因及血小板膜糖蛋白Ⅰ a(glycoproteinⅠa，GPⅠa

2、)基因等凝血系統(tǒng)基因相關(guān)單核苷酸多態(tài)(single nucleotidepolymorphisms，SNPs)位點(diǎn)，比較其在不同群體中等位基因、基因型及單體型(haplotype)等遺傳學(xué)分子標(biāo)記物的差異并分析其與腦出血的關(guān)聯(lián)，從分子水平探討腦出血的可能發(fā)病機(jī)理，為預(yù)防和治療腦出血提供堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)和實(shí)踐指導(dǎo)。
　　 方法：收集2006年1月至2009年10月在湘雅醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科就診的腦出血患者及部分家屬的資料，所有病例均經(jīng)CT和

3、/或MRI確診(依照第四屆全國(guó)腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議診斷標(biāo)準(zhǔn))；對(duì)照組來(lái)自同期湖南省長(zhǎng)沙地區(qū)漢族健康體檢人員。研究對(duì)象分為3組：(1)有家族聚集現(xiàn)象的腦出血家系(cerebral hemorrhage with family history，CHFH)組(65個(gè)家系共281例，包括腦出血患者65例，Ⅰ級(jí)親屬133例，Ⅱ級(jí)親屬36例、Ⅲ級(jí)親屬10例和健康無(wú)血緣關(guān)系親屬37例)，(2)散發(fā)性腦出血(sporadic cerebral hemorr

4、hage，SCH)組(195例)，及(3)對(duì)照組(116例)。CHFH組、SCH組與對(duì)照組的年齡、性別具有可比性。采用多重單堿基延伸SNP(Multiplex SnaPshot)分型技術(shù)對(duì)F1基因相關(guān)SNPs位點(diǎn)(rs1800790、rs1800787、rs6050)、F7基因相關(guān)SNPs位點(diǎn)(rs510317、rs6046)、ProZ基因相關(guān)SNPs位點(diǎn)(rs2273971、rs3024718、rs3024731)、F12基因相關(guān)SN

5、P位點(diǎn)(rs1801020)及GPⅠa基因相關(guān)SNP位點(diǎn)(rs1126643)進(jìn)行基因分型。對(duì)不同人群的基因分型結(jié)果分兩部分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)：(1)SCH組和對(duì)照組采用基于人群的病例-對(duì)照研究法，采用χ2檢驗(yàn)按Hardy-Weinberg平衡法檢測(cè)樣本的群體代表性。用χ2檢驗(yàn)及Logistic回歸分析，研究等位基因及基因型分布規(guī)律，從而篩查出與散發(fā)性腦出血相關(guān)的基因；用haploview軟件構(gòu)建單體型塊(haplotype block)；用PH

6、ASE軟件構(gòu)建單體型，用χ2檢驗(yàn)及Logistic回歸分析探討單體型與腦出血的相關(guān)性，進(jìn)一步篩查出與散發(fā)性腦出血相關(guān)的基因：(2)CHFH組采用基于家系的傳遞不平衡檢驗(yàn)(transmission disequilibriumtest，TDT)及關(guān)聯(lián)分析法，用FBAT軟件研究等位基因及單體型與腦出血的相關(guān)性，從而篩查出與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關(guān)的基因。
　　 結(jié)果：
　　 1.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群中存在F1基

7、因rs1800790、rs1800787、rs6050，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731，F(xiàn)12基因rs1801020及GPIa基因rs1126643此10種SNPs位點(diǎn)。
　　 2.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群中，GPIa基因rs1126643多態(tài)的T等位基因在SCH組中的頻率為0.339，明顯高于對(duì)照組(0.228，P=0.004)。Logis

8、tic回歸分析顯示T等位基因與散發(fā)性腦出血相關(guān)，是散發(fā)性腦出血的保護(hù)性因素(OR=0.577，95％CI：0.396—0.840，P=0.004)。但F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050SNPs位點(diǎn)，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046 SNPs位點(diǎn)，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點(diǎn)及F12基因rs1801020 SNP位點(diǎn)的等位基因頻率在SCH組與對(duì)照組間比

9、較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 3.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群中，GPIa基因rs1126643多態(tài)的CT及TT基因型在SCH組中的頻率分別為0.455與0.111，明顯高于對(duì)照組(分別為0.404與0.026，P=0.022)。Logistic回歸分析顯示CT及TT基因型均與散發(fā)性腦出血相關(guān)，且均是散發(fā)性腦出血的保護(hù)性因素(OR=0.180，95％CI：0.051—0.631，P=0.007；OR=0.267，

10、95％CI：0.076-0.943，P=0.040)。但F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點(diǎn)，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046 SNPs位點(diǎn)，ProZ基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點(diǎn)及F12基因rs1801020 SNP位點(diǎn)的基因型頻率在SCH組與對(duì)照組間比較均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 4.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群SCH組

11、及對(duì)照組中，F(xiàn)1基因的rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點(diǎn)位于同一單體型塊(D’均>0.7)，其構(gòu)成的單體型GCA(rs1800790+rs1800787+rs6050)、單體型GA(rs1800790+rs6050)及單體型CA(rs1800787+rs6050)均可增加散發(fā)性腦出血的危險(xiǎn)度近2倍(OR=1.738，95％CI：1.103—2.740，P=0.017)。其構(gòu)成的其它所有主要單體型頻率在SC

12、H組及對(duì)照組間比較，結(jié)果無(wú)顯著性差異(P>0.05)。蛋白Z基因rs2273971、rs3024718、rs3024731 SNPs位點(diǎn)位于同一單體型塊(D’均>0.7)，而F7基因rs510317及rs6046 SNPs位點(diǎn)可能位于同一單體型塊(D’>0.5)，F(xiàn)7基因rs6046及蛋白Z基因rs3024718亦可能位于同一單體型塊(D’>0.5)。但上述3個(gè)單體型塊中的SNPs構(gòu)建出的所有主要單體型頻率在SCH組及對(duì)照組間比較，結(jié)果

13、亦均無(wú)顯著性差異(P>0.05)。GPIa基因rs1126643及F12基因rs1801020 SNPs位點(diǎn)可能不在同一單體型塊中(D’<0.5)。
　　 5.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群CHFH組中，ProZ基因rs2273971多態(tài)的G等位基因存在過(guò)度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關(guān)(Z=1.882，P=0.049882)；而其A等位基因及rs3024718、rs3024731 SNPs位點(diǎn)的各等位基因無(wú)過(guò)度傳遞現(xiàn)

14、象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無(wú)關(guān)(Z<0和/或P>0.05)。且F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點(diǎn)，F(xiàn)7基因rs510317 SNP位點(diǎn)，GPIa基因rs1126643及F12基因rs1801020 SNPs位點(diǎn)的各等位基因亦均無(wú)過(guò)度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無(wú)關(guān)(Z<0和/或P>0.05)。因本研究樣本中攜帶F7基因rs6046 SNP位點(diǎn)的核心家系數(shù)不足FBAT軟件的要求的最低10個(gè)，

15、其等位基因TDT檢驗(yàn)未能得到結(jié)果。
　　 6.本研究結(jié)果顯示在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群CHFH組中，F(xiàn)7基因rs510317、rs6046與蛋白Z基因rs2273971、rs3024718、rs3024731SNPs位點(diǎn)在同一個(gè)單體型塊中(0

16、過(guò)度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關(guān)；其構(gòu)成的其余所有單體型均無(wú)過(guò)度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無(wú)關(guān)。F1基因rs1800790、rs1800787、rs6050 SNPs位點(diǎn)在同一個(gè)單體型塊中，GPIa基因rs1126643與F12基因rs1801020 SNPs位點(diǎn)亦在同一個(gè)單體型塊中，但它們各自構(gòu)成的所有單體型均無(wú)過(guò)度傳遞現(xiàn)象，與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無(wú)關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本研究首次發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)沙地

17、區(qū)漢族人群中凝血系統(tǒng)基因存在遺傳異質(zhì)性，為遺傳因素可能是長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群腦出血的發(fā)病機(jī)理之一提供了進(jìn)一步的證據(jù)。
　　 2.本研究在國(guó)內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)F1基因單體型GCA、單體型GA及單體型CA均是散發(fā)性腦出血的遺傳易感因素，但與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血無(wú)關(guān)；且F1基因rs6050位點(diǎn)可能是散發(fā)性腦出血的重要遺傳易感因素。而GPIa基因rs1126643多態(tài)的T等位基因及CT、TT基因型則均是散發(fā)性腦出血的保護(hù)性因素，但與有家族聚集現(xiàn)

18、象的腦出血無(wú)關(guān)；且T等位基因可能是散發(fā)性腦出血的重要遺傳保護(hù)性因素。
　　 3.本研究在國(guó)內(nèi)外首次發(fā)現(xiàn)ProZ基因rs2273971多態(tài)的G等位基因、單體型GA、單體型CG及單體型CGA均與有家族聚集現(xiàn)象的腦出血相關(guān)，但與散發(fā)性腦出血無(wú)關(guān)。且ProZ基因rs2273971 SNP位點(diǎn)G等位基因可能是有家族聚集現(xiàn)象腦出血的重要相關(guān)因素。
　　 4.本研究首次發(fā)現(xiàn)在長(zhǎng)沙地區(qū)漢族人群中，F(xiàn)7基因rs510317多態(tài)、ProZ基