蝙蝠葛堿對肥厚心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：蝙蝠葛堿(dauricien,Dau)是自防己科植物蝙蝠葛(Menispermumdauricum,DC)根莖中提取的一種雙卞基異喹啉類生物堿。已有研究顯示，蝙蝠葛堿具有拮抗鈣離子內(nèi)流，抗心律失常及抗氧化損傷等多重藥理作用。在本實驗中，我們采用甲狀腺素(Thyroxine,Thy)持續(xù)給藥法，制備大鼠心肌肥厚模型，在給藥的過程中同時給予蝙蝠葛堿，觀察蝙蝠葛堿對大鼠肥厚心肌的保護(hù)作用，并從抗氧化損傷指標(biāo)，離子轉(zhuǎn)運(yùn)酶，NO含量和NOS

2、活性及其基因表達(dá)等角度進(jìn)一步研究蝙蝠葛堿對大鼠心肌肥厚的保護(hù)機(jī)制。 方法：(1)甲狀腺素(0.5mg·kg-1·d-1)腹腔給藥法制備大鼠心肌肥厚模型，于給藥后第三天開始同時腹腔注射給予蝙蝠葛堿(10，40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米(10mg·kg-1·d-1)，模型制備時間共10天。取大鼠血清及心肌組織，稱取大鼠全心重和左心室重，計算心臟指數(shù)；測定大鼠血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)活力及心肌組織中丙二醛(

3、MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力，并進(jìn)行HE染色，觀察大鼠心肌組織的形態(tài)學(xué)變化，研究蝙蝠葛堿對肥厚心肌抗氧化和抗纖維化的影響。(2)如方法(1)制備模型及給藥。取大鼠心肌組織勻漿，測定組織中Na+，K+-ATP酶(Na+，K+-ATPase)和Ca2+，Mg2+-ATP酶(Ca2+，Mg2+-ATPase)活力，研究蝙蝠葛堿對心肌肥厚大鼠心肌組織中離子轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)ATP酶的影響。(3)如方法(1)制備模型及給藥。取心肌組織勻漿測一

4、氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活力，RT-PCR法測iNOS和eNOS基因表達(dá)情況，研究蝙蝠葛堿對大鼠肥厚心肌中上述因素的影響。 結(jié)果：(1)造成心肌肥厚的同時給予蝙蝠葛堿。模型組與陰性對照相比，大鼠心肌組織HE染色可見間質(zhì)纖維化和心肌細(xì)胞肥大明顯，心臟重量指數(shù)明顯增加，心肌組織中丙二醛(MDA)含量顯著增加，超氧化物歧化酶(SOD)活力顯著下降，血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)的活力顯著升高(P＜0.0

5、1)；與模型組相比，HE染色顯示，除蝙蝠葛堿低劑量組外，蝙蝠葛堿高劑量組(10，40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)組織纖維化和細(xì)胞肥大等情況均有顯著改善；蝙蝠葛堿各劑量組(10，40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)均明顯降低心臟重量指數(shù)(P＜0.05或P＜0.01)，且蝙蝠葛堿高劑量組(40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)對心臟重量指

6、數(shù)的改善優(yōu)于蝙蝠葛堿低劑量組(10mg·kg-1·d-1)。除蝙蝠葛堿低劑量組(10mg·kg-1·d-1)外，蝙蝠葛堿高劑量組(40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)均能顯著降低心肌組織中丙二醛(MDA)含量，增加超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低血清中肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)的活性(P＜0.05或P＜0.01)。(2)造成心肌肥厚的同時給予蝙蝠葛堿。模型組Na+，K+-ATP酶(Na+，

7、K+-ATPase)和Ca2+，Mg2+-ATP酶(Ca2+，Mg2+-ATPase)活力比陰性對照組分別上升了47％和36％，而與模型組相比蝠葛堿高劑量組(40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)心肌中Na+，K+-ATPase和Ca2+，Mg2+-ATPase活力均明顯下降(P＜0.05或P＜0.01)；(3)造成心肌肥厚的同時給予蝙蝠葛堿。①與陰性對照組相比，模型組NO含量明顯降低(P＜0.01)，N

8、OS活力組明顯升高(P＜0.01)，給予蝙蝠葛堿(10,40mg·kg-1·d-1)和維拉帕米(10mg·kg-1·d-1)后，蝙蝠葛堿高劑量組和維拉帕米組NO含量明顯升高，iNOS活力明顯降低，eNOS活力明顯升高(均P＜0.05)；②模型組心肌組織內(nèi)iNOS基因表達(dá)比陰性對照組極顯著升高，eNOS基因表達(dá)極顯著降低(P＜0.01)，與模型組相比，僅維拉帕米組(10mg·kg-1·d-1)iNOS基因表達(dá)明顯降低(P＜0.05)，蝙蝠

9、葛堿低劑量組(10mg·kg-1·d-1)和蝙蝠葛堿高劑量組(40mg·kg-1·d-1)有改善趨勢，但未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。eNOS基因表達(dá)除蝙蝠葛堿低劑量組，其余兩組均有顯著改善(P＜0.05或P＜0.01)。 結(jié)論：(1)心肌肥厚大鼠給予蝙蝠葛堿后可顯著降低大鼠心臟指數(shù)，提高大鼠心肌抗纖維化和抗氧化能力，表明蝙蝠葛堿在大鼠心肌肥厚的形成過程中對肥厚心肌有保護(hù)作用(2)蝙蝠葛堿可升高肥厚心肌中Na+，K+-ATPas和Ca2+，