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文檔簡介
1、六味地黃湯光合細菌代謝液(LW-PSB)是將優(yōu)選的光合細菌作為菌種,引入到六味地黃湯中進行代謝,通過光合細菌的生物轉化功能和自身營養(yǎng)價值的利用,制備出的六味地黃湯生物制劑,它是一種經(jīng)過微生物發(fā)酵而形成的含有光合細菌菌體蛋白及其代謝分泌物、培養(yǎng)基和中草藥發(fā)酵物的混合物。 中藥復方所含成分復雜,傳統(tǒng)的質量標準采用化學對照品或者對照藥材作為參比標準,試圖用這些已知的化合物來控制中藥的質量。但是,這些已知化學成分不能全面的代表該藥物的療
2、效,一些未知的化學成分常常被認為對藥效起重要作用,而這些未知的成分表現(xiàn)出復雜、數(shù)量巨大的特點。因此,傳統(tǒng)中藥質量控制方法是一種間接的、不完全的質量控制方法。 LW-PSB是由熟地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓等六味傳統(tǒng)中藥和光合細菌菌液以及培養(yǎng)基制備而成的,六味藥材本身成分復雜,再加上各組分之間復雜的相互作用以及光合細菌的代謝過程,使其成分更加復雜。為了較好地控制LW-PSB的質量,本論文制備不同代謝條件的藥液,在對其免疫
3、調節(jié)作用考察的基礎上,篩選出藥效最好的樣品,研究其對下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸的作用,并建立各樣品的HPLC 藥效指紋圖譜,找出與免疫調節(jié)作用相關的化學成分,從而揭示化學信息與藥效之間的相關性,文中還對藥效相關成分的來源進行了研究。 論文首先根據(jù)影響光合細菌生長的因素,就藥液濃度、pH值、接種量、代謝時間4個因素設計了光合細菌在不同條件下代謝六味地黃湯的正交試驗,由此制備得到了使用化學和豆?jié){兩種培養(yǎng)基代謝的18份LW-PS
4、B樣品。 之后課題組其他人員用甲狀腺素聯(lián)合利血平建立小鼠腎陰虛模型,分別給予小鼠這18份樣品,研究結果表明,LW-PSB能改善腎陰虛小鼠癥狀,增加腎陰虛小鼠的體重,并對腎陰虛小鼠脾臟的萎縮有拮抗作用,這說明LW-PSB具有治療腎陰虛和提高機體非特異性免疫作用。其中以樣品H2、H5、H8、D1、D2、D5的藥效最好,且與傳統(tǒng)的六味地黃湯相比更具有優(yōu)勢。化學培養(yǎng)基組以H2 的藥效最好,即在pH2、接種量X2、六味地黃湯濃度C1的條件
5、下以化學培養(yǎng)基代謝t2時間的藥液;豆?jié){培養(yǎng)基組以D1的藥效最好,即在pH1、接種量X1、六味地黃湯濃度C1的條件下以豆?jié){發(fā)酵液作為培養(yǎng)基代謝t1時間的藥液。在此基礎上,以治療腎陰虛證效果最好的樣品D1作為代表,論文深入研究了LW-PSB對腎陰虛小鼠HPA軸的影響,結果表明,腎陰虛小鼠服用LW-PSB后,能顯著降低血漿促腎上腺激素釋放激素(CRH)、促腎上腺激素(ACTH)、皮質酮(CorT)含量,即能對抗HPA 軸功能亢進,使其恢復正常
6、,說明LW-PSB調節(jié)HPA軸的平衡是其主要的藥理作用之一。 然后采用高效液相色譜技術,對LW-PSB使用乙腈-0.15%磷酸進行梯度洗脫,使其復雜的成分得以較好的分離,建立了LW-PSB的HPLC指紋圖譜。 接著將18份樣品的HPLC指紋圖譜與小鼠腎陰虛實驗所測得的藥理活性結果聯(lián)系起來,以此建立LW-PSB的HPLC藥效指紋圖譜,并采用多元線性回歸的方法,得到與藥效相關的14個峰,其中11個峰成正相關(包括已知峰沒食子
7、酸和丹皮酚),以X10對藥效的影響最大。由回歸的調整保留系數(shù)還可以看出,除已知成分外,LW-PSB中還有其他成分亦有顯著的增強免疫力的活性,這有待于進一步研究。 論文最后對于藥效相關成分的來源進行了研究,結果表明X1、X6來源于茯苓,X2、X3、X11來源于山茱萸和牡丹皮,X4來源于山藥和澤瀉,X7來源于山茱萸,X9來源于山茱萸和山藥,X10、X13、X15來源于牡丹皮,而X8、X12、X14則來源于多味藥材。 以上的研
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