人類皰疹病毒6型7型潛伏與復發(fā)性阿弗他潰瘍發(fā)生的相關性研究.pdf

1、背景與目的： 復發(fā)性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer，RAU)是最常見的口腔黏膜疾病，患病率高達20％左右，具有反復發(fā)作和緩慢自愈的特點，但病因不明。以往的學者用各種檢測病毒的方法包括經典的電鏡下觀察病毒顆粒、病毒培養(yǎng)、免疫血清學研究和現代的分子生物學技術如PCR等，分別以RAU患者病損組織、脫落上皮、唾液、外周血其中的一種或幾種作為研究對象，檢測病毒顆粒、DNA片段或血清特異性抗體，他們研究過的病毒

2、包括腺病毒、人類乳頭瘤病毒及人類皰疹病毒1至8型[1-10]，但是大多數沒有陽性結果，或患病組與對照組相比沒有統(tǒng)計學差異，或有的病毒在人體分布極其廣泛因而在病變部位的檢出也不具臨床意義，亦或在實驗方法上不統(tǒng)一、不完善，各結果之間不具可比性甚至互相矛盾。最近實時熒光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR；FQ-PCR)技術[11]在各個領域的應用越來越多，具有許多常規(guī)PCR不可比擬的優(yōu)點。

3、它在常規(guī)PCR的基礎上又增加了TaqMan探針和熒光信號，增加了目的片段擴增的特異性和敏感性。實時定量PCR技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，它有特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優(yōu)點。本實驗采用實時熒光定量PCR技術，同時檢測臨床唾液、脫落上皮細胞(病損區(qū)和非病損區(qū))、外周血(白細胞和血漿)樣本中人類皰疹病毒6和7型的DNA，進而探索人類皰疹病毒6型7型潛伏與復發(fā)性阿弗他潰瘍發(fā)生的相關性。 方法：

4、 2007年4月至2007年9月，在大連醫(yī)科大學附屬一院的口腔科以及大醫(yī)整形美容口腔門診，經臨床診斷確定的輕型RAU患者20例，進行臨床采樣，樣本包括唾液，健康黏膜處脫落上皮細胞，病變處脫落細胞，外周血(白細胞和血漿)。同時期選擇接近處理組年齡、性別及社會生活背景分布特征的健康對照組20例健康對照，取口腔黏膜脫落上皮細胞、唾液和外周血(白細胞和血漿)，大連醫(yī)科大學生物化學教研室核酸組進行樣本保存和DNA提取。同期于美國ABI生物公

5、司購買HHV-6及HHV-7(08-765-000)標準毒株：根據病毒基因文庫調出的HHV-6、7基因序列，設計并合成引物、熒光標記探針。先用特異性引物篩選HHV-6、7，其PCR片段克隆入載體，再對重組質粒進行篩選、測序及鑒定。確證后的DNA片段制成標準品并作為陽性模板，開發(fā)FQ-PCR檢測系統(tǒng)。用該系統(tǒng)測定研究樣品。最后180例提取出的總DNA本送寶生物公司進行病毒實時熒光定量PCR檢測。 結果： 1．本次實驗180

6、個標本只有一名患者病損處脫落細胞有HHV-7檢出，其余病毒均檢出于唾液標本，兩組中病毒的檢出率分別為，20例輕型RAU患者組HHV-6檢出為20％(4/20)，HHV-7檢出為35％(7/20)；20個對照組HHV-6檢出10％(2/20)，HHV-7檢出15％(3/20)。 2．卡方檢驗對HHV-6、HHV-7陽性例數分別進行了對照組和病例組的組間比較，結果P>0.05，無顯著性差異。對病例組兩種病毒感染率做病毒組間比較，結果

7、尚不能認為兩種病毒對RAU患者感染率不同。 3．采用兩組獨立樣本的非參數檢驗方法，對病例組4例和對照組2例HHV-6陽性檢出病毒的拷貝數進行統(tǒng)計檢驗，結果P<0.05，說明組間HHV-6病毒拷貝數有顯著差別，結果認為HHV-6病毒在組織細胞內增殖與RAU潰瘍的發(fā)生可能有相關性。 結論： 1.HHV-6、HHV-7隨機廣泛潛伏于人群中，其DNA陽性檢出對于RAU患者或健康個體不具診斷意義。 2．HHV-6、