RSV感染后毛細支氣管炎患兒免疫功能的變化.pdf

1、背景:呼吸道合胞病毒(RSV)是兒科常見的呼吸道病原之一,屬副黏病毒科肺炎屬,為多形、外有蛋白包裹的核內(nèi)RNA病毒,表面主要有兩類功能蛋白:G蛋白和F蛋白,其中G蛋白主要介導吸附,促進Th2型炎癥反應；而F蛋白主要介導胞膜融合及傳入,引起Th1型炎癥反應。目前普遍認為RSV感染所造成的免疫異常表現(xiàn)為Th1／Th2細胞功能和比例失衡,表現(xiàn)為Th1細胞及其分泌的因子不足,Th2細胞數(shù)量增多和功能亢進。Th1細胞主要分泌干擾素-γ(IFN-γ

2、)、白介素2(IL-2),腫瘤壞死因子(TNF-β)等,介導細胞免疫；Th2細胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-9、IL-10和IL-2等細胞因子,介導體液免疫。IL-4是Th2細胞生成的必需細胞因子。IFN-γ有利于Th1分化而抑制Th2細胞分化。有殺傷細胞內(nèi)感染,促進MHC抗原表達,增加抗原的提呈、促進抗原被識別,誘導B細胞產(chǎn)生同種異型抗體等作用,同時還具有抗病毒活性。RSV感染呈全球性分布,具有顯著的季節(jié)性,多流行于冬春兩季。主

3、要表現(xiàn)為毛細支氣管炎和肺炎,嚴重時可引起梗阻性肺氣腫,甚至可致呼吸衰竭、心力衰竭等。RSV感染還可引起哮喘等其他呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)生和發(fā)作。T-bet及GATA-3是決定CD4+的初始Th(Th0)細胞的分化方向的轉錄因子,起著Th1／Th2轉換開關的作用,同時二者又起著交互抑制的作用。與Th1細胞分化有關的轉錄因子中T-bet是起主導作用。T-bet,是2000年發(fā)現(xiàn)的一種Th1細胞特異性轉錄因子,在Th1細胞分化中起關鍵作用。它通過激

4、活IFN-γ的基因轉錄,誘導自身再表達,并通過細胞因子誘導Th0細胞向Th1細胞的分化。甚至在其他轉錄因子的協(xié)同作用下,T-bet可將分化中的Th2和已分化完全的Th2型細胞逆轉為Th1型細胞,伴隨大量產(chǎn)生的IFN-γ,抑制Th2類細胞因子(IL-4,IL-13,IL-5,IL-9,IL-10,IL-12,IL-6等)的產(chǎn)生。T-bet還可通過直接抑制Th2細胞特異性轉錄因子,進而抑制Th2細胞分化及促進Th1細胞分化。
　　

5、研究目的:探討毛細支氣管炎在RSV感染急性期及恢復期,與TH1／TH2細胞分化相關的IFN-γ、IL-4以及轉錄因子T-bet在外周血單個核細胞(PBMC)中表達的變化。
　　 研究方法:
　　 1.于毛細支氣管炎患兒發(fā)病急性期獲取鼻咽分泌物,過濾除菌后接種于長滿細胞培養(yǎng)瓶70％-80％處于生長對數(shù)期的Hep-2細胞,觀察細胞是否出現(xiàn)合胞體。同時留取外周血2ml,靜置留取血清檢測RSV IgM抗體,根據(jù)這兩方面檢測結果確

6、定毛支患兒是否RSV感染。
　　 2.實驗分組:①RSV感染后毛細支氣管炎發(fā)病急性期組(符合臨床毛支診斷標準)。②RSV感染后毛細支氣管炎恢復期組。③實驗對照組:取同期住院非感染性疾病患兒(主要為同期外科性疾病住院患兒)。取毛細支氣管炎患兒血標本分離PBMC,分成2等份置于24孔板中培養(yǎng),并以IL-21-2ug／L濃度[1、2]進行刺激,防止PBMC凋亡,培養(yǎng)6～24小時候收集細胞進行染色,進行流式細胞術檢測IL-4及IFN-γ

7、表達水平。另外,留取一份PBMC,提取RNA,進行RT-PCR,檢測T-bet在以上各組的變化。
　　 結果:
　　 1.結合患兒臨床表現(xiàn),流行病學研究,病毒學的實驗室檢查,及細胞培養(yǎng)后合胞體形成,表明毛細支氣管炎患兒系RSV感染后造成。
　　 2.毛支患兒疾病急性期IL-4較正常非感染患兒增高,而IFN-γ則低于正常水平；恢復期患兒IL-4下降,IFN-γ有所升高。
　　 3.T-bet轉錄因子在毛支患

8、兒表達減少,而在實驗對照組非感染性患兒表達相對偏高。
　　 結論:RSV感染后毛細支氣管炎患兒疾病急性期IL-4升高,IFN-γ較正常下降,恢復期IL-4下降,IFN-γ升高,說明毛支患兒體內(nèi)細胞因子在RSV感染后有明顯變化,存在以Th2優(yōu)勢的Th亞群失衡。支持目前普遍觀點-IL-4為Th2型細胞因子,IFN-γ為Th1型細胞因子二者此消彼長,相互作用,IFN-γ介導的細胞免疫對RSV有清除作用。轉錄因子T-bet在毛細支氣管炎