雄激素剝奪對(duì)雄性大鼠膀胱結(jié)構(gòu)和功能的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：雄激素剝奪對(duì)雄性大鼠膀胱組織結(jié)構(gòu)影響及其機(jī)制的研究
　　 研究目的
　　 探討雄激素剝奪對(duì)雄性大鼠膀胱組織結(jié)構(gòu)的影響，同時(shí)探討其可能的機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和方法
　　 本研究將實(shí)驗(yàn)雄性大鼠(Sprague-Dawley雄性大鼠)共36只，隨機(jī)分成四組：(1)雙側(cè)睪丸切除組(Emasculatedratsgroup，EMR組，即去勢(shì)組)：對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠施行雙側(cè)睪丸切除，以研究雄激素剝奪后對(duì)雄性大鼠膀

2、胱組織結(jié)構(gòu)的影響；(2)睪丸切除+雄激素替代治療組(Emasculatedratstreatedwithtestosteronegroup，EMR+T組，即去勢(shì)+激素組)：實(shí)驗(yàn)大鼠去勢(shì)后隨即給予雄激素肌肉注射補(bǔ)充治療，以進(jìn)一步探討雄激素剝奪對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠膀胱組織結(jié)構(gòu)的影響；(3)睪丸切除+TGF-β1中和抗體治療組(Emasculatedratstreatedwithanti-TGF-β1neutralizingantibodygroup，

3、EMR+A組，即去勢(shì)+抗體組)：實(shí)驗(yàn)大鼠去勢(shì)后隨即給予TGF-β1(轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1)中和抗體腹腔注射治療，以探討雄激素剝奪對(duì)膀胱組織結(jié)構(gòu)影響的分子機(jī)制；(4)假手術(shù)組(Shamsurgeryratsgroup，Sham組，即對(duì)照組)：本組實(shí)驗(yàn)大鼠僅做假手術(shù)處理，作為本實(shí)驗(yàn)的對(duì)照。
　　 2個(gè)月后，采用ELISA法檢測(cè)四組大鼠的血清總睪酮的水平；處死后取膀胱組織，以Masson'sTrichrome染色法顯示膀胱組織結(jié)構(gòu)，Im

4、ageProPlus6.0軟件定量分析了膀胱組織纖維化的程度；電鏡觀察膀胱超微結(jié)構(gòu)的改變；采用RealtimePCR檢測(cè)纖維化相關(guān)基因的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果
　　 雙側(cè)睪丸切除術(shù)后，EMR組大鼠血清內(nèi)雄激素水平顯著降低，達(dá)到去勢(shì)水平(0.002±0.0005ng/ml)。Masson'sTrichrome染色顯示膀胱內(nèi)大量平滑肌排列紊亂，大量纖維組織沉積于平滑肌間隙。隨后，我們利用ImageProPlus6.0軟件定量

5、分析了膀胱組織纖維化的程度，結(jié)果顯示EMR大鼠膀胱組織中膠原纖維面積/膀胱平滑肌面積比率較Sham組顯著升高。電鏡結(jié)果表明，與Sham組大鼠比較，EMR組大鼠膀胱平滑肌排列紊亂，細(xì)胞間間隙增寬，胞膜有高電子密度沉積物，脫落細(xì)胞胞漿成分散在細(xì)胞間隙，平滑肌間隙以纖維組織增生為主。RealtimePCR定量檢測(cè)pro-collagenImRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示EMR組大鼠pro-collagenImRNA的水平較Sham組大鼠顯著升高。

6、r>　　 雄激素補(bǔ)充治療2個(gè)月后，去勢(shì)大鼠血清總睪酮水平(1.432±0.303ng/ml)，明顯高于Sham組大鼠，說(shuō)明雄激素補(bǔ)充治療能有效維持血清睪酮水平。Masson'sTrichrome染色亦顯示，膀胱內(nèi)平滑肌結(jié)構(gòu)和排列有序，肌束間少量纖維結(jié)締組織，纖維組織面積/平滑肌面積比率較EMR組大鼠顯著降低，與Sham組大鼠無(wú)顯著差異；電鏡檢查結(jié)果顯示EMR+T組大鼠膀胱平滑肌排列整齊，細(xì)胞間隙有少量膠原纖維，細(xì)胞間以中間連接為主。E

7、MR+T組大鼠中pro-collagenImRNA的水平顯著低于EMR組大鼠，與Sham組大鼠無(wú)顯著性差異。
　　 為進(jìn)一步探討分子機(jī)制，我們檢測(cè)了EMR組大鼠膀胱內(nèi)TGF-β1mRNA的表達(dá)水平，結(jié)果顯示該組大鼠膀胱組織內(nèi)TGF-β1mRNA的水平較Sham組大鼠顯著升高。而雄激素補(bǔ)充治療后，EMR+T組大鼠膀胱內(nèi)TGF-β1mRNA的水平較EMR組大鼠顯著降低，與Sham組無(wú)顯著性差異。組織病理學(xué)和基因檢測(cè)的結(jié)果均表明，去勢(shì)

8、大鼠經(jīng)TGF-β1中和抗體治療后(EMR+A組)，膀胱平滑肌和纖維化的程度較EMR組大鼠顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論
　　 本研究顯示雄性大鼠去勢(shì)后，隨著血清總睪酮水平的降低，其膀胱表現(xiàn)出平滑肌超微結(jié)構(gòu)的改變和平滑肌損傷，從而導(dǎo)致膀胱纖維化的發(fā)生，補(bǔ)充雄激素治療能有效地阻止雄激素剝奪誘導(dǎo)的膀胱平滑肌結(jié)構(gòu)損傷和膀胱纖維化的發(fā)生。
　　 雄激素剝奪通過(guò)激活TGF-β信號(hào)通路導(dǎo)致膀胱纖維化的發(fā)生，利用TGF

9、-β中和抗體封閉該信號(hào)通路的活性能有效地阻止該病理過(guò)程，提示TGF-β可成為今后治療膀胱纖維化的重要靶點(diǎn)。
　　 第二部分：雄激素剝奪對(duì)大鼠膀胱功能的影響及機(jī)制研究
　　 研究目的
　　 探討雄激素剝奪對(duì)雄性大鼠膀胱功能的影響，同時(shí)闡明其分子機(jī)制。
　　 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和方法
　　 本研究將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成四組(參見(jiàn)第一部分)，于術(shù)后2個(gè)月，對(duì)四組大鼠進(jìn)行尿流動(dòng)力學(xué)檢查，檢測(cè)各組大鼠膀胱最大容量和膀胱順

10、應(yīng)性，評(píng)估各組大鼠的膀胱功能。
　　 結(jié)果
　　 EMR組大鼠膀胱最大容量0.51±0.16ml，較Sham組大鼠顯著減少(1.25±0.20ml)。此外，EMR組大鼠膀胱順應(yīng)性(0.015±0.005ml/cmH2O)較Sham組大鼠顯著降低(0.029±0.007ml/cmH2O)。EMR+T組大鼠膀胱最大容量(1.38±0.23ml)較EMR組大鼠有顯著提高，與Sham組大鼠相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；膀胱順應(yīng)性(0.029

11、±0.008ml/cmH2O)較EMR組(0.015±0.005ml/cmH2O)大鼠也顯著升高。EMR+A組在給予TGF-β中和抗體治療后，EMR+A組大鼠膀胱最大容量(0.96±0.27ml)較EMR組大鼠(0.51±0.16ml)顯著增加，膀胱順應(yīng)性(0.023±0.004ml/cmH2O)亦顯著升高。
　　 結(jié)論
　　 本研究表明雄激素剝奪后，可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)大鼠膀胱最大容量和順應(yīng)性的降低，而雄激素補(bǔ)充治療能有效預(yù)防雄