Ectoines高效制備技術(shù)及其應(yīng)用研究.pdf

1、Ectoines（1，4，5，6-四氫-2-甲基-4-嘧啶羧酸，Ectoine;1，4，5，6-四氫-2-甲基-5-羥基-4-嘧啶羧酸，Hydroxyectoine）是中度嗜鹽菌在滲透壓脅迫下合成的一類滲透壓補(bǔ)償溶質(zhì)。Ectoines在高溫、冷凍和干燥等逆環(huán)境下，對(duì)酶、蛋白質(zhì)、核酸及整個(gè)細(xì)胞具有保護(hù)作用，被廣泛應(yīng)用于化妝品、生物制劑穩(wěn)定劑、藥物制劑等領(lǐng)域的研究與應(yīng)用，Ectoines的制備技術(shù)日益受到關(guān)注。本文分離鑒定Ectoines合

2、成菌株，獲得了Ectoine分泌型菌株和耐受滲透壓沖擊的Hydroxyectoine合成菌株。研究高效制備Ectoines的新工藝。同時(shí)研究了Ectoine在高濃度乙醇發(fā)酵中的應(yīng)用。
　　 從鹽場(chǎng)鹽池中分離篩選獲得了22株Ectoines合成菌株。HPLC方法檢測(cè)到了菌株DLB06和DLS12的發(fā)酵培養(yǎng)基中存在Ectoine特征峰物質(zhì)。菌株DLC31經(jīng)HPLC和1H-NMR鑒定合成Hydroxyectoine，生理生化鑒定該菌株

3、為Cobetiamarina?？寺×薈.marina的Ectoine合成酶基因，并進(jìn)行了基因結(jié)構(gòu)分析。
　　 HPLC和LC-MS方法發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)了分離菌株DLB06和DLS12的Ectoine分泌現(xiàn)象?？疾炝薔aCl濃度對(duì)菌株DLS12Ectoine分泌的影響。Ectoine分泌量隨NaC1濃度的降低而升高。菌株DLS12對(duì)NaCl脅迫的應(yīng)答、Ectoine合成濃度閾值等與已有文獻(xiàn)報(bào)道的菌株顯著不同，是Ectoine合成菌株的一

4、個(gè)新類型。10L發(fā)酵罐Eetoine分批發(fā)酵，Ectoine分泌型菌株DLS12的Ectoine總合成濃度是H.elongataDSM2581總合成濃度的2.7倍。
　　 本文分離鑒定的C.marina，耐受滲透壓沖擊，適合細(xì)菌擠奶工藝條件，利用該菌株進(jìn)行的Hydroxyectoine細(xì)菌擠奶，制備效率較分批發(fā)酵提高了71.9％，Hydroxyectoine對(duì)底物的轉(zhuǎn)化率是分批發(fā)酵的2.5倍。
　　 高葡萄糖濃度對(duì)Zym