亞甲基藍(lán)光化學(xué)法對(duì)全血中人免疫缺陷Ⅰ型病毒（HIV-1）的滅活研究.pdf

1、本課題以噬菌體f2、日本腦炎病毒(JEV)和人免疫缺陷Ⅰ型病毒(HIV-1)為試驗(yàn)病毒，對(duì)短波紫外線(xiàn)(UVC)照射法、γ-射線(xiàn)照射法、核黃素(Riboflavin)光化學(xué)法、金絲桃素(Hypericin)光化學(xué)法和亞甲基藍(lán)(Methyleneblue，MB)等五種光化學(xué)法的滅活血液中病毒效果進(jìn)行評(píng)價(jià)；通過(guò)正交試驗(yàn)篩選最佳方法的最適作用條件，并充分驗(yàn)證其滅活病毒效果。為評(píng)價(jià)處理方法的毒性作用，分別以昆明種小鼠和日本大耳白兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)M

2、B產(chǎn)生的急性和慢性毒性進(jìn)行觀察，通過(guò)自動(dòng)生化檢測(cè)儀對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肝腎功能進(jìn)行檢測(cè)；采用微核試驗(yàn)測(cè)定兔淋巴細(xì)胞微核率以及多核細(xì)胞法測(cè)定兔淋巴細(xì)胞Hprt基因位點(diǎn)突變頻率，研究MB的致突變作用。 試驗(yàn)結(jié)果顯示：1.在篩選試驗(yàn)的最大作用劑量下，UVC(1500μW/cm2)、核黃素(40μmol/L)+可見(jiàn)光(40000Lux)、金絲桃素(20μmol/L)+可見(jiàn)光(40000Lux)、MB(10μmol/l)+可見(jiàn)光(40000Lux

3、)分別作用40min以及γ射線(xiàn)作用400Gy使血液中的f2噬菌體分別下降1.46log、1.10log、2.25log、4.27log、5.37log，同時(shí)血漿游離Hb分別增加279.52mg/l、8444.31mg/l、2.72mg/l、3.36mg/l、3.05mg/l。按照既能有效滅活血液中的病毒，又能保持血液的成份和功能沒(méi)有明顯變化的原則，初步篩選出的最佳消毒方法是MB光化學(xué)法。 2.正交實(shí)驗(yàn)顯示，MB光化學(xué)效應(yīng)對(duì)血液中

4、病毒的滅活作用受MB含量、可見(jiàn)光照射強(qiáng)度和照射時(shí)間等因素的影響。試驗(yàn)篩選的最佳處理?xiàng)l件(15μmol/LMB+40000Lux照度的鹵鎢燈照射40min)下可以使f2噬菌體下降超過(guò)5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。MB與可見(jiàn)光照射兩因素的T/E值大于1，具有顯著協(xié)同增效作用。 3.在設(shè)計(jì)的光化學(xué)應(yīng)用模型處理下，當(dāng)MB終濃度為15μmol/L、可見(jiàn)光照度為40000Lux時(shí)，全血中的日本腦炎病毒在照射20min時(shí)被完全滅活，滅活滴度為7.0LogTCI

5、D50；在40000Lux光照條件下，當(dāng)與5μmol/L的MB聯(lián)合作用30min，10μmol/L的MB聯(lián)合作用20min，15μmol/L的MB聯(lián)合作用10min均可完全滅活血液中的HIV-1病毒，滅活滴度為5.78LogTCID50。 4.MB對(duì)小鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)小鼠體內(nèi)MB濃度(15mmol/kg)為試驗(yàn)濃度(15μmol/l)的800倍時(shí)，小鼠未見(jiàn)死亡。試驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠體重變化無(wú)明顯差異(P＞0.05)。全

6、自動(dòng)生化分析結(jié)果表明各組小鼠肝腎功能無(wú)顯著差異(P＞0.05)，均維持在正常值范圍內(nèi)。 5.MB對(duì)兔的慢性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)兔體內(nèi)MB濃度(604μmol/kg)為試驗(yàn)濃度(15μmol/l)的80倍時(shí)，兔未見(jiàn)死亡，全自動(dòng)生化分析結(jié)果表明各組兔肝腎功能無(wú)顯著差異(P＞0.05)，均維持在正常值范圍內(nèi)。 6.慢性毒性試驗(yàn)結(jié)束后，兔外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)顯示，試驗(yàn)組的微核率均值(2.14±1.0‰)與陰性對(duì)照組的微核率均值