PARP-1及其相關因子在低劑量甲醛誘導的毒物興奮效應及適應性反應中的表達改變.pdf

1、　 本研究以甲醛為研究對象，MTT法建立適應性反應模型并用流式細胞術驗證后，用實時熒光定量PCR法檢測不同劑量毒物刺激及適應性反應過程中PARP-1與其相關因子DNA-PK、ATM、P53、NF-кB的表達改變，驗證PARP-1被低劑量毒物激活，促進斷裂DNA的修復，從而使細胞對繼后大劑量毒物攻擊產生耐受的機制，初步探討PARP-1與其相關因子在適應性反應過程中的可能聯(lián)系，為研究PARP-1在低劑量ECPs接觸時參與應激/適應過程的細

2、胞與分子機制提供理論依據。 材料和方法:1.MTT法測定細胞增殖功能，建立適應模型，確定實驗分組：采用噻唑藍顏色反應法(MTT法)略為改進。做出甲醛誘導人胚肺成纖維細胞MRC-5毒性的劑量-反應關系曲線，選用無毒性濃度作為預處理劑量(D1)，IC50左右的濃度作為攻擊劑量(D2)，建立低劑量甲醛誘導MRC-5細胞產生的適應性反應模型。另外，在低劑量甲醛預處理后加入PARP-1抑制劑PJ34(5μM)，看其是否抑制MRC-5細胞對

3、高劑量甲醛致DNA斷裂的適應現象。最后確定實驗分組為：對照組、D1組、D2組、D1+D2組、D1+PJ34組、D1+PJ34+D2組。2.流式細胞術檢測細胞凋亡，同時驗證所建立的適應模型：培養(yǎng)MRC-5至對數生長期，按所建立的適應模型分組處理后，2.5mg/L胰蛋白酶消化收集各組細胞，用AnnexinVFITC/PI復染，流式細胞術檢測細胞變化情況，驗證MTT法所建立的適應模型。3.RealtimeRT-PCR檢測各組細胞中PARP-1