IGF-1及相關(guān)蛋白在病毒性心肌炎的表達(dá)和黃芪甲甙的干預(yù)研究.pdf

1、第一部分 目的:觀察病毒性心肌炎小鼠不同時(shí)點(diǎn)血漿、心肌組織中IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3 等相關(guān)蛋白的表達(dá)，探討其在病毒性心肌炎的發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 方法:取4 周齡雄性Balb/c小鼠60 只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（20 只）和病毒實(shí)驗(yàn)組（40 只）。病毒實(shí)驗(yàn)組于實(shí)驗(yàn)當(dāng)日一次腹腔注射0.1ml含1×102TCID50CVB3(Nancy株)病毒液，空白對(duì)照組腹腔注射0.1ml不含病毒的Eagle’s細(xì)胞培

2、養(yǎng)液。分別于實(shí)驗(yàn)第3d、7d、15d、30d隨機(jī)處死部分小鼠，用ELISA法測(cè)血漿IGF-1的表達(dá)，心肌病理切片HE染色，免疫組化法和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關(guān)蛋白的表達(dá)。 結(jié)果: （1）病毒性心肌炎小鼠血漿IGF-1 檢測(cè)均值為（565.75±63.2）pg/ml,空白對(duì)照組為（365.92±37.31）pg/ml，病毒實(shí)驗(yàn)組較空白對(duì)照組高，差異有顯著性。 （2

3、）小鼠在感染CVB3病毒后血漿IGF-1 表達(dá)逐漸增高，15d達(dá)最高峰，30d表達(dá)降低但仍維持在一較高水平，在各時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組IGF-1 值比較，差異均有顯著性。 （3）心肌組織免疫組化染色示在正常心肌組織有IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關(guān)蛋白的低表達(dá)，小鼠感染CVB3病毒后IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 等相關(guān)蛋白表達(dá)增高，以15d時(shí)最明顯，其灰度值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR方法檢測(cè)心肌組織IGF

4、-1 及IGFBP3 mRNA表達(dá)在病毒實(shí)驗(yàn)組亦高于空白對(duì)照組。 結(jié)論:IGF-1—IGF-1R—IGFBPs 軸可能在病毒性心肌炎發(fā)病機(jī)制中有重要作用。 第二部分 目的:觀察黃芪甲甙對(duì)急性小鼠病毒性心肌炎干預(yù)后，IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3等相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，探索黃芪甲甙的治療機(jī)制。 方法:4周齡雄性Balb/c小鼠65 只，隨機(jī)分為A、B、C、D、E五組。A組為正?？瞻讓?duì)照組10 只，實(shí)

5、驗(yàn)當(dāng)日僅腹腔接種0.1ml不含病毒的Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)液，每天以配制黃芪甲甙的羥甲基纖維素鈉溶液灌胃1 次，連續(xù)2周；B組為正常黃芪對(duì)照組10只，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日腹腔接種Eagle’s細(xì)胞培養(yǎng)液，每天以9％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；C組為黃芪高劑量治療組15只，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日腹腔接種0.1ml內(nèi)含1×102TCID50CVB3病毒，每天以9％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；D組為黃芪低劑量治療組15 只，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日腹腔接種0.1ml內(nèi)含1×102

6、TCID50CVB3病毒，每天以1％黃芪甲甙液灌胃1次，連續(xù)2周；E組為病毒對(duì)照組15 只，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日腹腔接種CVB3病毒，每天以羥甲基纖維素鈉液灌胃1次，連續(xù)2 周。觀察各組小鼠死亡率，第15 天常規(guī)無(wú)菌采血、取心臟，用ELISA法測(cè)血漿IGF-1的表達(dá)，并作心肌病理切片HE染色，觀察心肌病理學(xué)改變；免疫組化技術(shù)和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)心肌組織中IGF-1、IGF-1R及IGFBP3 的表達(dá)。 結(jié)果: （1）C組死亡率較D

7、、E組明顯降低，B組無(wú)小鼠死亡。 （2）C組心肌病變積分比D、E組明顯下降，病變程度明顯輕于D、E組，D組和E 組間病變積分及程度無(wú)顯著差異。 （3）ELISA法檢測(cè)血漿IGF-1 均值A(chǔ) 組為365.92 pg/ml, B組為372.23pg/ml, C組為472.46 pg/ml, D組為654.51 pg/ml, E組為648.75pg/ml，與A組比較，C組均值增高，D、E組明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，B組無(wú)顯

8、著差異，D組與E組間亦無(wú)顯著差異。 （4）心肌組織免疫組織化學(xué)染色及RT-PCR 檢測(cè)在蛋白水平和mRNA 水平均提示，正常心肌組織中有IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3低表達(dá)，在C 組表達(dá)稍增高，在D、E組表達(dá)顯著增高，而B組無(wú)明顯變化，D、E 組間表達(dá)無(wú)明顯差異。 結(jié)論:黃芪甲甙干預(yù)可降低小鼠IGF-1、IGF-1R 及IGFBP3等相關(guān)蛋白的表達(dá)，推測(cè)黃芪甲甙對(duì)急性病毒性心肌炎小鼠心肌組織的保護(hù)作用可能是通過(guò)