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文檔簡介
1、該研究通過RT-PCR技術(shù)從小鼠脂肪細胞中克隆了不含信號肽序列的全長小鼠gAcrp30 cDNA,序列測定表明該研究已克隆的gAcrp30序列同國外報道的序列一致.將不含信號肽序列的小鼠gAcrp30基因克隆至原核表達載體pET-21a中,構(gòu)建成重組原核表達質(zhì)粒pET-21a/gAcrp30.將該重組質(zhì)粒導入宿主菌BL21,經(jīng)IPTG誘導后獲得高水平表達(目標蛋白表達>20﹪).經(jīng)SDS-PACE分析表明:表達產(chǎn)物主要為不可溶性的蛋白質(zhì)
2、聚集體-包涵體.將已收集的菌體經(jīng)超聲破碎后,2mol/L尿素,1﹪吐溫-80洗滌后,離心收集包涵體.該包涵體經(jīng)80mol/L尿素溶解變性后,采用透析和稀釋二種復性方法進行復性比較,復性樣品經(jīng)陰離子交換層析Q-Sepherose Fast Flow和Q-Sepherose high performance(h.p.)二步陰離子交換層析得到單一條帶,分子量為25KDa.免疫印跡結(jié)果表明,通過表達和純化所獲得的蛋白為小鼠gAcrp30.上述研
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