中藥菊花主要藥用成分分析及揮發(fā)油指紋圖譜研究.pdf

1、菊花(FlosChrysanthemi)是傳統(tǒng)中藥，它是菊科菊屬植物菊(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的頭狀花序，被《中國(guó)藥典》收載的菊花有滁菊、貢菊、亳菊、杭菊。 傳統(tǒng)研究認(rèn)為：菊花具有清熱解毒，止血消腫，疏肝明目等功能。現(xiàn)代藥理研究表明，菊花具有抗腫瘤、消炎、抗菌、抗氧化、增加冠脈流量、抗心肌缺血等多種生理活性。 研究表明，菊花中所含的揮發(fā)油及黃酮類化合物與其生理活性密切相關(guān)。因此本實(shí)驗(yàn)

2、旨在研究不同種類的菊花在主要黃酮苷元含量、揮發(fā)油成分、揮發(fā)油主要成分含量、揮發(fā)油GC-MS指紋圖譜上的差別，并較為系統(tǒng)地觀察產(chǎn)地、等級(jí)、炮制方法、采摘時(shí)間、物候期、貯存時(shí)間等對(duì)菊花黃酮類成分和揮發(fā)油成分含量的影響。 1.菊花水解木犀草素及芹菜素含量分析目的：建立菊花水解木犀草素及芹菜素含量測(cè)定方法，比較不同種類菊花上述兩成分的含量差別，并較為系統(tǒng)地觀察產(chǎn)地、等級(jí)、炮制方法、采摘時(shí)間、物候期、貯存時(shí)間對(duì)杭白菊黃酮類成分含量的影響。

3、 方法：以正交試驗(yàn)法考察鹽酸濃度、甲醇濃度、水解溫度、水解時(shí)間四個(gè)因素對(duì)木犀草素苷和芹菜素苷水解效率的影響，確定最終提取條件。以RP-HPLC法測(cè)定木犀草素及芹菜素含量。色譜條件為：安捷侖ZorbaxSB-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，柱溫35℃；流動(dòng)相：甲醇：0.20﹪磷酸51：49(v/v)；流速1ml·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)344nm，進(jìn)樣量20μl。 結(jié)果：優(yōu)化的菊花黃酮類成分的最終水解條件為：0.2

4、5g菊花粗粉，加30ml鹽酸甲醇溶液(鹽酸2.4mol/L、甲醇80﹪(v/v))，水解溫度80℃，水解時(shí)間2h。木犀草素、芹菜素的線性及范圍分別為2.233～71.456μg·ml1(r=1.000)，1.668～53.376μg·ml-1(r=1.000)；日內(nèi)精密度分別為RSD2.4﹪、1.6﹪；日間精密度分別為3.6﹪、3.2﹪；該方法平均回收率分別為100.3﹪(RSD0.83﹪)、103.9﹪(RSD0.91﹪)。不同品種菊

5、花上述成分含量存在較大差別，而對(duì)于道地杭白菊，木犀草素、芹菜素含量的變化趨勢(shì)幾乎一致。木犀草素、芹菜素含量隨著采摘期延后和等級(jí)降低、花開放程度增大而下降；不同種植基地有所差異，而貯存時(shí)間對(duì)兩者含量影響不大。 結(jié)論：本研究建立含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可同時(shí)測(cè)定菊花中木犀草素、芹菜素的含量；菊花中水解木犀草素及芹菜素含量受多種因素影響，木犀草素和芹菜素含量可以作為評(píng)價(jià)菊花品質(zhì)的依據(jù)之一。 2.菊花揮發(fā)油的研究目的：

6、建立菊花揮發(fā)油中β-欖香烯、樟腦、龍腦含量測(cè)定方法；比較不同品種的菊花揮發(fā)油成分的含量差別，并較為系統(tǒng)地考察種植基地、等級(jí)、炮制方法、采摘時(shí)間、物候期、貯存時(shí)間對(duì)杭白菊揮發(fā)油中上述3成分含量的影響，為菊花揮發(fā)油的利用提供參考。 方法：以正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察提取時(shí)間、加水量、浸泡時(shí)間、粉碎程度四個(gè)因素對(duì)揮發(fā)油提取率的影響，確定最終提取條件。以氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定菊花揮發(fā)油中β-欖香烯、樟腦、龍腦含量。選擇正辛烷為樟腦、龍腦測(cè)定內(nèi)標(biāo)，正十

7、四烷為β-欖香烯內(nèi)標(biāo)。色譜柱：安捷侖HP-5毛細(xì)管柱；柱溫：起始溫度70℃，以2.5℃·min-1升溫速率升至140℃，再以10℃·min-1升溫速率升至260℃；氣化室溫度280℃；檢測(cè)器FID溫度300℃；分流比20：1；氮?dú)饬魉?ml·min-1，空氣350ml·min-1，氫氣70ml·min-1，靈敏度10AUFS。 結(jié)果：菊花揮發(fā)油的優(yōu)化的提取條件為：菊花粉末50g，加水500ml，細(xì)度50目，微沸5h。β-欖香烯、

8、樟腦、龍腦的線性范圍分別為0.6250～10.00mg·ml-1(r=0.9999)，0.02231～0.3570mg·ml-1(r=0.9993)，0.01143～0.1828mg·ml-1(r=0.9996)；方法重復(fù)性實(shí)驗(yàn)RSD分別為0.90﹪、1.7﹪、1.9﹪；方法平均回收率分別為98.2﹪(RSD1.7﹪)、97.8(RSD0.45﹪)和100.4(RSD1.6﹪).。不同品種菊花上述成分含量存在較大差別；在杭白菊中，β～欖

9、香烯含量較高；采摘時(shí)間對(duì)β-欖香烯含量無(wú)明顯；不同種植基地、炮制工藝、等級(jí)、物候期、貯存時(shí)間的杭白菊β-欖香烯含量有所差異，但是，樟腦及龍腦含量極低，且變化無(wú)規(guī)律。 結(jié)論：本研究建立的含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可同時(shí)測(cè)定菊花揮發(fā)油中β-欖香烯、樟腦、龍腦含量；菊花揮發(fā)油中上述3種成分含量受各種因素影響。 3.菊花揮發(fā)油指紋圖譜研究目的：建立杭白菊揮發(fā)油的色譜指紋圖譜，控制菊花揮發(fā)油質(zhì)量穩(wěn)定性以及鑒別不同品種菊花的

10、揮發(fā)油。 方法：以GC-MS法對(duì)杭白菊揮發(fā)油樣品進(jìn)行分析，獲取菊花揮發(fā)油指紋圖譜，并采用夾角余弦法比較了不同產(chǎn)地、不同物候期、不同品種菊花的相似度，以聚類分析法進(jìn)行分類。色譜條件：GC：DB-5MS毛細(xì)管色譜 (0.25mm*30m*0.25μm)；進(jìn)樣口溫度260℃；載氣為高純氦，流速為1.0ml·min-1；恒流，分流比25：1，進(jìn)樣量為2μl；柱溫：80℃2℃·min-1100℃(45min)0.5℃·min-11

11、32℃5℃·min-1250℃(10min)MS：EI源(70ev)，雙燈絲，離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；質(zhì)量范圍m/z50～500全程掃描；延時(shí)3min。 結(jié)果：采用本文建立的GC/MS色譜條件進(jìn)行杭白菊揮發(fā)油指紋圖譜研究，精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性良好，可用于識(shí)別不同產(chǎn)地、品種菊花。對(duì)同一杭白菊種植基地的道地藥材進(jìn)行相似度比較，其相似度在0.92以上。 結(jié)論：建立的氣相指紋圖譜可以作為菊花鑒別和質(zhì)量控制的