廣西莪術(shù)揮發(fā)油GC-MS指紋圖譜的構(gòu)建及其譜效關(guān)系的研究.pdf

1、本學(xué)位論文利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)分析技術(shù)對廣西道地產(chǎn)區(qū)的10批次廣西莪術(shù)樣品進(jìn)行比較分析，采用國家藥品監(jiān)督管理局推薦的“中藥色譜指紋圖譜計(jì)算機(jī)相似性評價系統(tǒng)”進(jìn)行模式分析及相似度計(jì)算，建立了廣西莪術(shù)油GC-MS特征指紋圖譜，得到廣西莪術(shù)油GC-MS指紋圖譜特征峰面積值；以不同濃度的廣西莪術(shù)油分別處理鼻咽癌CEN-2細(xì)胞，噻唑藍(lán)(MTT)法檢測莪術(shù)油對CNE-2細(xì)胞的毒性和不同濃度的莪術(shù)油對CNE-2細(xì)胞生長增殖抑制作用；

2、Hochest33342熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞的發(fā)生及形態(tài)學(xué)變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測其凋亡率，蛋白免疫印跡法檢測核轉(zhuǎn)錄因子KB(NF-κB)蛋白的表達(dá)；將獲得的10批次不同產(chǎn)地的廣西莪術(shù)油特征峰面積值和莪術(shù)油對鼻咽癌CEN-2細(xì)胞的增殖抑制率進(jìn)行灰關(guān)聯(lián)度分析，對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行規(guī)格化，根據(jù)規(guī)格化值計(jì)算參考數(shù)列與比較數(shù)列的絕對差值、各特征峰與對腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率的關(guān)聯(lián)系數(shù)、各特征峰與對腫瘤細(xì)胞的增殖抑制率的關(guān)聯(lián)度。結(jié)果如下：
　　 (1

3、)通過GC-MS檢測了廣西莪術(shù)油含有52種化學(xué)成分，鑒定了39種成分，主要為萜類及倍半萜衍生物；廣西莪術(shù)油指紋圖譜檢測出20個共有特征峰，特征峰峰面積之和占總峰面積的93.0％以上，10批次樣品具有較高的相似度(＞0.90)；10批次廣西莪術(shù)油的指紋圖譜中各特征成分均得到了較好分離，具有特征性和唯一性。
　　 (2)莪術(shù)油對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞有較強(qiáng)的體外細(xì)胞毒性作用，明顯的抑制鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的生長，存在著劑量-時間-效應(yīng)

4、的關(guān)系；莪術(shù)油能誘導(dǎo)鼻咽癌CNE-2細(xì)胞NF-κB的凋亡，其分子機(jī)制之一可能是通過下調(diào)NF-κB的表達(dá)，從而達(dá)到抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖，促進(jìn)凋亡，發(fā)揮抑制腫瘤生長的作用。
　　 (3)莪術(shù)油中主要的抗腫瘤活性成分為莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、β-欖香烯、吉馬酮、莪術(shù)酮，其中莪術(shù)醇與腫瘤細(xì)胞抑制作用具有高度關(guān)聯(lián)(關(guān)聯(lián)度＞0.90)，莪術(shù)二酮、β-欖香烯、吉馬酮、莪術(shù)酮與腫瘤細(xì)胞抑制作用的關(guān)聯(lián)度均在0.70以上。其它各特征峰代表的化學(xué)成分與其增

5、殖抑制作用的關(guān)聯(lián)度均在0.60～0.80之間；依據(jù)關(guān)聯(lián)度的大小，各成分對抗腫瘤作用貢獻(xiàn)的大小順序?yàn)椋狠g(shù)醇＞莪術(shù)二酮＞β-欖香烯＞吉馬酮＞莪術(shù)酮＞α-丁子香烯＞δ-瑟林烯＞β-石竹烯＞β-欖香烯酮＞a-蒎烯＞α-石竹烯＞桉油素＞樟腦＞2-壬醇＞異龍腦莪術(shù)烯＞δ-欖香烯＞莰烯＞D-檸檬烯＞龍腦。廣西莪術(shù)抗腫瘤作用是其“有效組分群”共同作用的結(jié)果。
　　 本研究建立了廣西莪術(shù)油GC-MS指紋圖譜，確定了廣西莪術(shù)油“有效組分群”指紋特