水楊酸鈉對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞中HSP27表達(dá)的影響及意義.pdf

1、目的: 國內(nèi)外均有報道長期服用水楊酸鈉可延緩或阻止白內(nèi)障的發(fā)病，但其在預(yù)防白內(nèi)障方面的作用機(jī)制還未有明確的研究報道。本實(shí)驗(yàn)觀察水楊酸鈉對H2O2誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞中熱休克蛋白27（Heat Shock Protein 27，HSP27）表達(dá)的影響，探討水楊酸鈉在延緩白內(nèi)障發(fā)病中的作用機(jī)制。探討水楊酸鈉在防治原發(fā)性白內(nèi)障方面的可能性，為臨床上防治原發(fā)性白內(nèi)障提供新的可能的防治方法。
　　 材料及方法: 體外培養(yǎng)人晶狀體

2、上皮細(xì)胞，取第2、3代傳代培養(yǎng)的晶體上皮細(xì)胞。將細(xì)胞隨機(jī)分為三組：⑴正常對照組;⑵氧化損傷組（OS組）：細(xì)胞中加入150 μmol/L H2O2；⑶藥物作用組：細(xì)胞中分別加入不同濃度的水楊酸鈉（200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L）和150 μmol/L H2O2。
　　 1.噻唑蘭染色法（MTT）：將細(xì)胞轉(zhuǎn)移入三個96孔培養(yǎng)板，分組處理，每組細(xì)胞設(shè)6個復(fù)孔，三個96孔培養(yǎng)板分別作用2

3、h、6h和16h后用MTT酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔吸光光度OD值。
　　 2.免疫細(xì)胞組化：制作細(xì)胞爬片，分組處理，作用6小時后用免疫細(xì)胞組化法檢測各組細(xì)胞中HSP 27的表達(dá)情況。
　　 3.RT－PCR法：分組處理細(xì)胞，作用6小時后提取各組細(xì)胞總RNA，用RT－PCR法檢測HSP 27 mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果: 通過MTT法檢測得出：體外培養(yǎng)的晶狀體上皮細(xì)胞氧化損傷后細(xì)胞活力較正常對照組明顯降低（P＜

4、0.01）；三個作用時間下，各藥物作用組細(xì)胞活力均高于氧化損傷組（P＜0.01）,其中作用6h時，藥物作用組與氧化損傷組細(xì)胞活力差異最大且前一組細(xì)胞活力隨藥物濃度增加而上升并在600mg/L時達(dá)到高峰。免疫細(xì)胞組化法檢測得出：體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞均少量表達(dá)HSP 27。氧化損傷后HSP 27蛋白表達(dá)增加，藥物作用后HSP 27蛋白表達(dá)進(jìn)一步增加且比氧化損傷組增加的程度更大，藥物濃度600mg/L時HSP 27蛋白表達(dá)水平達(dá)到高峰。

5、RT－PCR法檢測得出：體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞均少量表達(dá)HSP 27 mRNA。氧化損傷后HSP 27 mRNA表達(dá)增加，藥物作用后HSP 27 mRNA表達(dá)進(jìn)一步增加且比氧化損傷組增加的程度更大，藥物濃度600mg/L時HSP 27 mRNA表達(dá)水平達(dá)到高峰。與各組細(xì)胞中HSP 27蛋白表達(dá)情況基本一致。
　　 結(jié)論: 經(jīng)H2O2處理后人晶狀體上皮細(xì)胞活力明顯低于于正常對照組,提示細(xì)胞活力的下降在白內(nèi)障的早期發(fā)展中起重要作