冷季型香菇（Lentinula edodes）菌種的分子鑒定.pdf

1、本研究選用了32個(gè)應(yīng)用廣泛的冷季型香菇栽培品種和2個(gè)野生香菇菌種，應(yīng)用ITS區(qū)序列差異比較、RAPD技術(shù)、ISSR分子標(biāo)記和培養(yǎng)性狀比較分析了它們之間的遺傳相關(guān)性，結(jié)果表明： 1.通過(guò)對(duì)ITS區(qū)的序列分析表明，所有栽培香菇菌株序列同源性為98.49％，其中868、滬農(nóng)3、秦19和香66，以及野11、慶科20、867和241-4之間有完全相同的序列。是否這些菌種是同物異名有待進(jìn)一步證實(shí)。相反的，華939、939與L939有相似的名

2、稱，但I(xiàn)TS區(qū)序列存在5個(gè)堿基的差異。將所有栽培菌株的ITS區(qū)序列結(jié)合從GenBank中查尋的國(guó)外的野生菌株的ITS區(qū)序列進(jìn)行系統(tǒng)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)野生香菇菌株與栽培香菇菌株分屬于兩個(gè)分枝，說(shuō)明栽培菌株與野生菌株間有遺傳差異，栽培菌株間存在極大的遺傳相似性，而且菌種間的遺傳關(guān)系與地域沒(méi)有聯(lián)系。這進(jìn)一步暗示32個(gè)栽培菌株的遺傳多樣性低。 2.從86個(gè)RAPD隨機(jī)引物中篩選出9個(gè)引物對(duì)供試菌株的基因組DNA進(jìn)行分析，共擴(kuò)增出113條帶，

3、其中94條帶具有多態(tài)性，多態(tài)性帶的比率達(dá)83.19％。單個(gè)引物擴(kuò)增的DNA片段的平均數(shù)目在13，片段的分子量大小在200～2500bp之間。如用引物A04擴(kuò)增菌株868獲得7條帶，其片段大小在400～2300bp之間。綜合分析9個(gè)具有多態(tài)性的DNA指紋圖譜，被測(cè)試的34個(gè)香菇菌種之間均有遺傳上的差異，能將所有菌株區(qū)分開(kāi)來(lái)，從而證實(shí)了RAPD技術(shù)可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地用于食用菌菌種的檢測(cè)和鑒定。從遺傳相似系數(shù)及聚類結(jié)果表明，野生子實(shí)體與栽

4、培品種之間存在明顯的遺傳差異；而多數(shù)栽培菌種聚在一起，遺傳相似系數(shù)主要集中在0.50～0.70之間，說(shuō)明香菇栽培菌種間的遺傳背景十分單一。菌株華939、939和L939聚在一起，說(shuō)明親緣關(guān)系相近，可能是同物異名。 3.從100個(gè)ISSR引物中篩選出8個(gè)對(duì)供試菌株具有多態(tài)性的引物進(jìn)行擴(kuò)增，共產(chǎn)生98條DNA帶，89.80％呈現(xiàn)多態(tài)性。如引物812擴(kuò)增所有菌株共獲得13條帶。聚類分析結(jié)果顯示，34個(gè)香菇菌株間均有遺傳上的差異，但遺傳

5、相關(guān)性極高。同時(shí)表明ISSR擴(kuò)增指紋能有效分辨不同菌株的基因型，為香菇栽培菌株的鑒定提供快速有效的技術(shù)手段和科學(xué)依據(jù)。菌株華939、939和L939聚在一起，說(shuō)明親緣關(guān)系相近，可能是同物異名。這與RAPD結(jié)果一致。 4.通過(guò)菌株栽培性狀比較試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)32個(gè)菌株在菌絲生長(zhǎng)速率、菌絲長(zhǎng)勢(shì)、菌落形態(tài)和出現(xiàn)原基的時(shí)間等方面有一定的差異。如平板試驗(yàn)中，菌株Cr20生長(zhǎng)緩慢，而香26生長(zhǎng)快。其中在平板試驗(yàn)和瓶栽試驗(yàn)中，菌絲生長(zhǎng)速率趨于一致，