2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、關(guān)節(jié)軟骨損傷是臨床上的常見病,由于關(guān)節(jié)軟骨缺乏血液循環(huán)和神經(jīng)支配,其自行修復(fù)能力有限。骨軟骨聯(lián)合缺損常影響到關(guān)節(jié)的機(jī)械穩(wěn)定性,從而增加骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生的危險(xiǎn)。因此,研究開發(fā)合適的骨軟骨移植替代材料具有廣泛的現(xiàn)實(shí)意義。本研究從以下幾個(gè)方面對(duì)一種新型骨軟骨一體化移植修復(fù)材料進(jìn)行了探索,材料的一體化設(shè)計(jì)可有效解決移植物的軟骨與骨部分的整合問題,同時(shí)材料的分層結(jié)構(gòu)又分別適合相應(yīng)的軟骨或骨組織的生長分化。
  1.膠原/殼聚糖/納米TCP一體

2、化骨軟骨層狀修復(fù)體的孔隙結(jié)構(gòu)和細(xì)胞相容性研究
  目的:對(duì)膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)體作為組織工程支架材料的孔隙結(jié)構(gòu)和細(xì)胞相容性進(jìn)行檢測(cè)和評(píng)估。
  方法:以膠原、殼聚糖、納米TCP為基本材料,通過無毒交聯(lián)和冷凍干燥方法制備膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)體。以體積法測(cè)定支架材料的孔隙率,掃描電鏡觀察材料的孔隙結(jié)構(gòu)及孔徑大小。原代培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(MSC),傳至第二代后以3.0×105個(gè)/m

3、l的細(xì)胞濃度接種于材料,MTT法于接種后2、4、6、9、12d測(cè)細(xì)胞在材料上的生長曲線。2w后掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料上的粘附情況。
  結(jié)果:通過體積法測(cè)定材料的孔隙率為95%,SEM可以觀察到支架材料具有疏松多孔結(jié)構(gòu),孔隙結(jié)構(gòu)規(guī)則,孔徑100~150μm,材料內(nèi)部孔與孔之間貫通良好;納米TCP被包裹在修復(fù)體表面,兩者結(jié)合緊密,顆粒分布較為均勻。MSC在材料上增殖迅速,細(xì)胞基本呈現(xiàn)對(duì)數(shù)生長趨勢(shì)。SEM顯示MSC在材料上經(jīng)三維培養(yǎng)1

4、4d后生長狀態(tài)良好,細(xì)胞成片地粘附于支架表面及孔隙側(cè)壁,并可見細(xì)胞間通過突起相互連接成片。
  結(jié)論:膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)材料具有良好的孔隙結(jié)構(gòu)和孔隙率,細(xì)胞在材料上能夠很好的粘附和生長,并且增殖迅速,有望成為一種新型組織工程支架材料。
  2.膠原/聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)體的體外三維軟骨誘導(dǎo)和異位成軟骨實(shí)驗(yàn)
  目的:探索膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)材料接種MSC

5、后體外三維成軟骨誘導(dǎo)的可行性。
  方法:2月齡日本大耳白兔8只,分別抽取其雙側(cè)頸骨平臺(tái)下方骨髓,密度梯度離心法分離MSC,原代培養(yǎng)。待細(xì)胞傳至第二代,以2×106個(gè)/ml的濃度接種于支架材料,24孔板內(nèi)培養(yǎng),隨即培養(yǎng)液更換為含rhTGFβ110μg/L、地塞米松1×107mol/L、VitC50μg/L、新生牛血清100mL/L的軟骨誘導(dǎo)液。2w后取材料-細(xì)胞復(fù)合物切片,HE、甲苯胺蘭染色觀察材料內(nèi)部的細(xì)胞生長情況和誘導(dǎo)分化情況

6、;其余材料自體回植于兔股部肌袋。6w后取材,HE染色、甲苯胺蘭染色、II型膠原免疫組化染色進(jìn)一步鑒定細(xì)胞在體內(nèi)的分化效果。
  結(jié)果:MSC在體外三維軟骨誘導(dǎo)培養(yǎng)過程中增殖迅速,切片染色可見細(xì)胞呈多層覆蓋于材料表面及內(nèi)部孔壁,部分細(xì)胞生長成團(tuán),甲苯胺蘭染色可見材料內(nèi)的細(xì)胞大部分呈現(xiàn)陽性,支架材料部分降解,但總體結(jié)構(gòu)無明顯改變。經(jīng)體外誘導(dǎo)2w后的細(xì)胞/材料復(fù)合物自體肌袋埋植6w后,可見支架材料大部分降解,軟骨樣組織在材料內(nèi)部形成,甲

7、苯胺蘭和免疫組化染色均呈現(xiàn)陽性。
  結(jié)論:膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)材料接種MSC后可被三維誘導(dǎo)向軟骨分化,并保持旺盛的增殖能力。經(jīng)誘導(dǎo)2w的細(xì)胞材料復(fù)合物植入自體骨部肌袋后,能進(jìn)一步向軟骨方向分化。
  3.復(fù)合bBMP骨軟骨修復(fù)材料的研制
  目的:將具有高效成骨、成軟骨活性的牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bBMP)復(fù)合入材料當(dāng)中,以增強(qiáng)材料的生物活性。
  方法:稱取bBMP40mg,溶于4ml4M

8、鹽酸胍。將膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)體浸泡于bBMP溶液中,排盡材料內(nèi)部氣泡。將充分吸附bBMP溶液的材料打包于透析膜內(nèi),對(duì)蒸餾水透析4d,而后冷凍干燥12h,環(huán)氧乙烷消毒備用。取3塊復(fù)合bBMP的材料噴金后行掃描電鏡觀察。取6塊復(fù)合bBMP的材料以1×106個(gè)/ml的細(xì)胞濃度接種兔MSC,2w后掃描電鏡觀察細(xì)胞在材料上的粘附和生長情況。
  結(jié)果:材料復(fù)合bBMP后大體形狀及孔隙結(jié)構(gòu)與復(fù)合前無異,掃描電鏡可以清

9、楚觀察到材料表面及孔隙內(nèi)部有絲絮狀bBMP薄膜,MSC在生物材料上生長迅速,黏附良好,材料的表面及孔隙內(nèi)部均有大量MSC生長。
  結(jié)論:應(yīng)用透析方法制備的生物材料保持了良好的結(jié)構(gòu),具有良好的細(xì)胞相容性,同時(shí)理論上將大大提高材料的生物學(xué)性能。
  4.復(fù)合bBMP骨軟骨修復(fù)材料用于兔關(guān)節(jié)骨軟骨缺損修復(fù)的初步研究
  目的:以復(fù)合bBMP的生物活性材料修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損,驗(yàn)證材料的生物活性。
  方法:2.5±0.

10、2kg體重日本大耳白兔8只,在雙側(cè)股骨髁間窩處制造直4mm深達(dá)髓腔下的缺損。將8塊復(fù)合bBMP的骨軟骨修復(fù)材料分別植入右側(cè)缺損作為實(shí)驗(yàn)組,4塊不含bBMP的膠原/殼聚糖/納米TCP一體化層狀修復(fù)體植入左側(cè)缺損作為對(duì)照組1,其余4個(gè)左側(cè)缺損曠置作為對(duì)照組2。12周后取材,大體觀察及切片染色觀察缺損修復(fù)情況。
  結(jié)果:12周后,實(shí)驗(yàn)組骨軟骨缺損被白色透明組織覆蓋,與周圍軟骨連接緊密,已無明顯分界線;對(duì)照1骨軟骨缺損內(nèi)為白色纖維樣組織

11、填充,缺損輪廓依然明顯;對(duì)照2缺損依然較深,中心僅少量組織填充。鏡下實(shí)驗(yàn)側(cè)HE染色顯示透明軟骨形態(tài),甲苯胺蘭染色顯示新生組織軟骨表型明顯,軟骨下骨修復(fù)良好;對(duì)照1缺損表面以纖維樣組織修復(fù),軟骨下骨已經(jīng)基本修復(fù);對(duì)照2仍有較深的缺損,缺損頂部覆以纖維樣組織。
  結(jié)論:膠原/殼聚糖/納米TCP一體化骨軟骨層狀修復(fù)體復(fù)合bBMP后具有較強(qiáng)的生物活性,能在早期較好的修復(fù)骨軟骨聯(lián)合缺損。
  以上研究結(jié)果表明,膠原/殼聚糖/納米TC

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