陽離子修飾的PEG化聚乳酸納米基因載體的實驗研究.pdf

1、中南大學(xué)碩士學(xué)位論文陽離子修飾的PEG化聚乳酸納米基因載體的實驗研究姓名：陳記稷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：何剪太20070601碩士學(xué)位論文 中文摘要結(jié)合D N A 分子的作用。目的：構(gòu)建一種理想的納米基因載體轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，使其能有效的保護轉(zhuǎn)運基因不被核酶降解，并具備較高的基因轉(zhuǎn)染效率、有效的輸送基因至靶位點以及良好的生物相容性。方法：在本研究中，基于我們的前期工作，首次創(chuàng)新性的選擇單甲氧基聚乙二醇．聚乳酸( M e P

2、 E G - P L A ) 和殼聚糖( e h i t o s a n ，c s ) 通過透析過濾法來制各M e P E G - P L A - C S 納米粒作為基因轉(zhuǎn)運載體，并用正交實驗設(shè)計方法安排實驗，優(yōu)選制各工藝條件。使用A F M ( 原子力顯微鏡) 和Z e t a s i z e r ( M a r l v e n ，粒徑分析儀) 來檢測M e P E G - P L A - C S納米粒和M e P E G ．P L

3、A ．C S ／D N A 復(fù)合物的Z e t a 電位以及粒徑分布。我們通過靜電吸附作用將M e P E G ．P L A —C S 納米粒和帶正電荷的D N A 的結(jié)合在一起形成M e P E G - P L A ．C S ／D N A 復(fù)合物，通過分光光度計法來檢測M e P E G ．P L A - C S ／D N A 復(fù)合物中D N A 的濃度，從而計算D N A 的結(jié)合效率。通過凝膠阻滯實驗和D N a s e I 消化實

4、驗來檢測該基因載體轉(zhuǎn)運系統(tǒng)對D N A 的保護能力。采用M T T 法研究M e P E G - P L A - C S 納米粒對人肝癌細(xì)胞( H e p G 2 ) 及正常肝細(xì)胞( t , - 0 2 )的影響。使用M e P E G ．P L A - C S 攜帶p E G F P - C 1 ( 綠色熒光蛋白質(zhì)粒)p D N A 作為報導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染C O S 7 細(xì)胞來評價體外轉(zhuǎn)染效率，其中商業(yè)化脂質(zhì)體( L i p o f e c