蟲草菌誘導(dǎo)柞蠶蛹產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的分離純化和抑菌活性研究.pdf

1、本文以鱗翅目昆蟲柞蠶(A．pernyi)滯育蛹和蟲草真菌(C．militaris)為試驗(yàn)材料，對利用柞蠶滯育蛹人工培養(yǎng)柞蠶蛹蟲草的條件、培育出的柞蠶蛹蟲草及誘導(dǎo)后柞蠶蛹中的抗菌物質(zhì)進(jìn)行了分離、純化，并對其抗菌物質(zhì)的活性以及誘導(dǎo)后蟲體的生理生化指標(biāo)的變化等方面進(jìn)行了研究，結(jié)果表明： 1．人工培養(yǎng)柞蠶蛹蟲草的關(guān)鍵階段為光照培養(yǎng)以后，最佳溫度、濕度、光照和pH值分別為22±2℃，80％，10h/d，pH5～7。 2．柞蠶蛹蟲草

2、經(jīng)過水提、醇沉、去蛋白、去離子、脫色后，粗多糖的得率為2.611％，抑菌試驗(yàn)表明，該多糖對供試的金黃色葡萄球菌、枯草桿菌和蘇云金芽孢桿菌有著非常明顯的抑制作用；對柞蠶鏈球菌抑制作用稍弱，與前三者之間呈顯著差異(P<0.05)；對大腸桿菌和乳酸桿菌作用不明顯；對供試真菌均沒有抑制作用。 3．蟲草菌誘導(dǎo)柞蠶蛹后血淋巴抑菌活性在3～4d達(dá)到最大值，對大部分供試細(xì)菌、真菌有作用。對其中的金黃色葡萄球菌和柞蠶鏈球菌的抑菌活性與對其它供試真

3、菌、細(xì)菌的抑菌活性有顯著差異(P<0.05)；其次為乳酸桿菌；再次為大腸桿菌、小麥赤霉、煙草赤星、水稻惡苗、葡萄白腐、玉米小斑、番茄早疫病菌；然后為玉米彎孢和柞蠶白僵病菌；對其他供試菌株無作用。 大腸桿菌、柞蠶鏈球菌誘導(dǎo)柞蠶蛹后的同期血淋巴與蟲草菌相比抑菌活性差別不明顯；但經(jīng)二者誘導(dǎo)柞蠶蛹提取液抑菌活性在蠶蛹死亡后逐漸減弱，直至消失；經(jīng)蟲草菌誘導(dǎo)柞蠶蛹硬化后提取液抑菌譜較硬化前發(fā)生變化，即：對蘇云金芽孢桿菌的活性增強(qiáng)；對柞蠶鏈球

4、菌的抑制作用減弱；對大腸桿菌、乳酸桿菌和供試真菌無明顯抑菌作用；對原來沒有作用的枯草桿菌產(chǎn)生明顯的抑制作用。 4．對蟲草菌誘導(dǎo)柞蠶蛹后的血淋巴，依次經(jīng)過SephadexG-50、SephadexG-100凝膠過濾層析，CM-Sepharose Fast Flow陽離子交換層析，對其進(jìn)行Tricine-SDS．PAGE電泳，得到分子量約為3kDa的抗菌肽。用抑菌圈法檢測抑菌活性，發(fā)現(xiàn)分離純化后得到的物質(zhì)對供試的大部分細(xì)菌、真菌有明