食管癌及食管正常組織中MT-3基因CpG島甲基化的地區(qū)性差異研究.pdf

1、目的: 我國是食管癌的高發(fā)國家，而河北省太行山區(qū)與廣東省潮汕地區(qū)是我國食管癌的高發(fā)地區(qū)。食管癌的發(fā)生是多種癌基因的激活與抑癌基因的失活長期協(xié)同作用的結果?；虍惓＜谆悄壳八某蛔儭⑷笔Ш鸵莆恢獾牧硪环N基因異常改變，與其它基因異常相比，基因的甲基化研究不僅對惡性腫瘤的病因、早期診斷及預后評價有很大價值，而且對腫瘤的基因治療研究有著重要的作用。目前已知，MT-3基因是細胞內一種金屬硫蛋白的編碼基因，不僅具有許多重要的生理功

2、能，還可以抑制細胞增殖，已有研究發(fā)現MT-3基因在食管癌和胃癌中均存在異常甲基化。本課題應用MSP和RT-PCR方法檢測河北地區(qū)和潮汕地區(qū)新鮮食管癌標本及非高發(fā)區(qū)正常人食管組織中的MT-3基因甲基化對MT-3基因mRNA表達的影響，以期揭示MT-3基因甲基化在不同區(qū)域食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法: 1選取10例正常人血液有核細胞和10例胎兒食管組織，應用MSP技術，對其MT-3基因CpG島甲基化的情況進行研究，旨在揭

3、示正常人血液有核細胞和胚胎組織中MT-3基因甲基化情況。 2選取20例非食管癌高發(fā)區(qū)正常人食管組織標本，應用MSP技術，對其MT-3基因CpG島的甲基化情況進行研究，從而了解正常人群中MT-3基因CpG島的甲基化情況。 3應用MSP技術和RT-PCR技術對30例河北地區(qū)食管癌患者新鮮手術標本及切緣正常組織及30例潮汕地區(qū)食管癌患者新鮮手術標本及切緣正常組織進行MT-3基因CpG島甲基化情況和MT-3基因mRNA表達量的研

4、究，以闡明MT-3基因CpG島的甲基化和MT-3基因mRNA表達與食管癌發(fā)生發(fā)展的關系，及食管癌及正常組織中MT-3基因甲基化在南北地區(qū)差異。 結果: 1.MT-3基因CpG島在正常人血液有核細胞及胎兒食管組織中無甲基化。 2非高發(fā)區(qū)正常人食管組織MT-3基因CpG島有少量的甲基化。與高發(fā)區(qū)人群中食管正常切緣組織標本比較，兩者之間差異有顯著性P=0.043。 3.MSP結果顯示河北地區(qū)食管癌組織和正常切緣

5、組織標本中MT-3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化率分別為83％(25/30)和36.6％(11/30)。兩者之間有統(tǒng)計學意義P=0.00。潮汕地區(qū)食管癌組織和正常切緣組織標本中MT-3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化率分別為80％(24/30)和30％(9/30)。兩者之間有統(tǒng)計學意義P=0.00。但兩地區(qū)之間比較無統(tǒng)計學意義。 4綜合MSP和RT-PCR結果可得出MT-3 mRNA表達率在MT-3基因CpG島甲基化的腫瘤組織與MT-3基

6、因CpG島非甲基化的腫瘤組織分別為23％和71％，即甲基化的腫瘤組織中MT-3基因mRNA表達率低于非甲基化組織，二者比較有統(tǒng)計學意義P=0.035。 5 RT-PCR結果顯示河北地區(qū)標本中MT-3基因在食管癌腫瘤組織表達明顯低于正常組織。潮汕地區(qū)標本中MT-3基因在食管癌腫瘤組織表達亦明顯低于正常組織。但兩地區(qū)之間比較無統(tǒng)計學意義。 6 MT-3的甲基化與患者的性別、年齡、組織分化、腫瘤侵犯深度和腫瘤的分期等臨床病理資料參數之

7、間均無關。 結論: 1正常人血液單核細胞及胎兒食管組織中MT-3無甲基化。 2非高發(fā)區(qū)正常人群食管組織中MT-3有少量甲基化，考慮為年齡因素所致。高發(fā)區(qū)人群食管正常切緣組織甲基化比非高發(fā)區(qū)人群食管組織甲基化比率高，說明高發(fā)區(qū)的某些環(huán)境因素刺激可導致MT-3基因甲基化。 3.MSP結果證實河北地區(qū)和潮汕地區(qū)食管癌組織中MT-3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化程度明顯高于食管切緣正常組織，即食管癌組織中MT-3基因

8、啟動子區(qū)CpG島廣泛存在甲基化。但兩地區(qū)之間MT-3基因啟動子區(qū)CpG島甲基化程度比較無差異。表明不同的生活環(huán)境均可促使MT-3甲基化的發(fā)生。 4 RT-PCR結果表明河北地區(qū)和潮汕地區(qū)食管癌組織標本中MT-3基因mRNA的表達量均低于食管正常切緣組織標本，即食管癌組織中廣泛存在MT-3蛋白表達水平下降，說明MT-3基因CpG島的甲基化與食管癌的發(fā)生和發(fā)展確實存在必然聯系。而兩地區(qū)之間MT-3基因mRNA水平相似，說明MT-3蛋