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文檔簡介
1、基因組印記(GenomicImprinting)是指控制某一表型的一對等位基因由于親源的不同而呈差異性表達(dá),即機體僅轉(zhuǎn)錄來自親本一方的等位基因而與自身性別無關(guān)。所謂印記丟失(LossofImprinting,LOI)是指被印記的無活性的等位基因被重新激活。胰島素樣生長因子Ⅱ基因(Insulin-LikeGrowthFactor2,IGF2)是父源表達(dá)的印記基因,編碼一個強有力的有絲分裂原,促使細(xì)胞增殖。在多種成人腫瘤中都發(fā)現(xiàn)有IGF2L
2、OI的發(fā)生,意味著胰島素樣生長因子Ⅱ表達(dá)加倍,可促使細(xì)胞惡性增殖與轉(zhuǎn)化,參與腫瘤的發(fā)生。維持IGF2正常印記及印記丟失的分子機制尚未明確,差異性甲基化區(qū)域(DifferentiallyMethylatedRegion,DMR)被認(rèn)為在印記調(diào)節(jié)中起重要作用,DMR即卵子和精子中對同一基因位點不同程度的甲基化區(qū)域。 本課題研究了原發(fā)性食管癌中印記基因IGF2的表達(dá)、IGF2基因的印記狀態(tài)及基因內(nèi)部DMR的甲基化情況,探討原發(fā)性食管癌
3、的發(fā)生及DMR參與IGF2的印記調(diào)節(jié)的表觀遺傳學(xué)機制。收集新鮮的原發(fā)性食管癌及其相應(yīng)的癌旁正常粘膜組織54例,提取并純化總RNA;半定量RT-PCR分析46例樣本IGF2的表達(dá)量與食管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。以ApaI酶切位點的限制性片段長度多態(tài)性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)確定樣本IGF2的基因型,確定用于LOI和甲基化分析的信息樣本;RT-PCR結(jié)合RFLP檢測信息樣本IGF2的
4、印記狀態(tài);亞硫酸氫鈉修飾信息樣本的基因組DNA,nest-PCR擴增IGF2DMR,擴增產(chǎn)物純化克隆進(jìn)入pGEM(R)-TEasy載體,每樣本隨機取10個陽性克隆行序列測定以反映了不同親本來源的均衡性,分析IGF2DMR甲基化情況。 結(jié)果表明:46對原發(fā)性食管癌樣本中有29對(63%)腫瘤組織IGF2的表達(dá)量高于相應(yīng)癌旁正常粘膜組織,且其表達(dá)水平與組織樣本的病理分級相關(guān)(P<O.05),隨著病理分化程度降低,IGF2的表達(dá)量有升
5、高的趨勢,但I(xiàn)GF2的表達(dá)水平與樣本的臨床分期無明顯相關(guān)。54對原發(fā)性食管癌組織中有24對(44.4%)表現(xiàn)為ApaI酶切位點雜合型,即信息樣本;24對信息樣本中有5對(21%)腫瘤組織和其相應(yīng)的癌旁正常粘膜組織發(fā)生了IGF2LOI,另有一對組織樣本表現(xiàn)為癌組織發(fā)生IGF2LOI,而其癌旁正常粘膜組織印記正常,發(fā)生印記丟失的樣本均存在IGF2的表達(dá)量增加。印記正常的樣本中IGF2DMR甲基化程度平均為29.7%,發(fā)生LOI的樣本IGF2
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