腺苷蛋氨酸誘導肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶活性的機制研究.pdf

1、新生兒高膽紅素血癥（neonatal hyperbilirubinemia，NHB）是新生兒時期的常見病，可引起多器官系統(tǒng)損害。盡快降低血清膽紅素水平是治療新生兒高膽紅素血癥的關鍵。目前臨床常用的治療有光療、換血療法、藥物治療三個方面的措施，三者各有利弊，故尋找一種能安全、經(jīng)濟、有效地降低血清膽紅素水平的藥物對治療新生兒高膽紅素血癥具有突出意義。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基轉(zhuǎn)移酶（UDP-glucuronosyltransferase，UGT

2、）是膽紅素結(jié)合的關鍵酶，可使脂溶性的非結(jié)合膽紅素變成水溶性的結(jié)合膽紅素而排出體外。
　　腺苷蛋氨酸（S-adenosyl-L-methionine，SAMe）是體內(nèi)內(nèi)源性物質(zhì)，參與體內(nèi)多種重要的生化反應，可作為底物參與合成半胱氨酸、牛磺酸、谷胱苷肽、輔酶A等重要物質(zhì)，并作為基因供體或酶性誘導劑在人體組織三大代謝過程中起到轉(zhuǎn)甲基、轉(zhuǎn)硫基和丙氨化(多聚胺合成)作用。該藥應用于臨床已有多年，其適應證主要針對肝內(nèi)膽汁郁積、肝炎高膽紅素血癥

3、等黃疸，能有效降低血清結(jié)合膽紅素水平，近年來國內(nèi)有報道稱SAMe輔助治療新生兒高膽紅素血癥有一定療效。因此，我們從分子生物學的角度，分析SAMe對人胎肝細胞（LO2）的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA表達和蛋白的生成、活性的影響。
　　第一部分：
　　腺苷蛋氨酸誘導肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA表達的研究
　　目的：
　　分別給予不同濃度、時間的SAMe干預LO2細胞，比較受干預的LO2細胞在尿苷二磷酸

4、葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶mRNA水平的變化，探討SAMe對LO2細胞UGT的mRNA表達水平的影響及最佳的干預條件。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)LO2細胞，待細胞約70％鋪滿培養(yǎng)板底部，進行分組：⑴SAMe處理組，根據(jù)預實驗結(jié)果加入SAMe使其終濃度分別為1、0.5、0.1mmol/L；⑵陽性對照組，予以肝酶誘導劑，終濃度為2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可剎米；⑶陰性對照組，不作加藥處理。加藥培養(yǎng)24h、48h、72h、92

5、h后收集細胞。通過熒光定量PCR檢測各組的mRNA水平。
　　結(jié)果：
　　LO2細胞的UGT1A1 mRNA經(jīng)一定濃度 SAMe誘導后增加，其中以濃度為0.5mmol/L組最為明顯，該組經(jīng)SAMe誘導24h后細胞的UGT1A1 mRNA開始增高（49.18±10.16，P<0.05），48h達到高峰（130.69±9.23，P<0.05），72h后明顯下降（28.25±9.42，P<0.05），此后未見明顯變化；與肝酶誘導劑

6、組比較，其誘導LO2細胞生成UGT1A1 mRNA的量更多，作用時間更長（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　適當濃度的SAMe對LO2細胞的UGT1A1的mRNA表達有誘導生成作用，表達量及時效均比肝酶誘導劑好。
　　第二部分：
　　腺苷蛋氨酸誘導肝臟尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶蛋白表達的研究
　　目的：
　　分別給予不同濃度、時間的SAMe干預LO2細胞，比較受干預的LO2細胞在UGT蛋白表達及分泌水

7、平的變化，探討SAMe對LO2細胞的UGT的蛋白表達、分泌水平的影響及最佳的干預條件。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)LO2細胞，待細胞約70%鋪滿培養(yǎng)皿底部，進行分組：⑴SAMe處理組，根據(jù)預實驗結(jié)果加入SAMe使其終濃度分別為1、0.5、0.1mmol/L；⑵陽性對照組，終濃度為2mmol/L苯巴比妥＋5mmol/L尼可剎米；⑶陰性對照組，不加藥處理。加藥培養(yǎng)24h、48h、72h、92h后收集細胞。通過western blo

8、t及ELISA檢測各組的UGT1A1蛋白表達、分泌水平。
　　結(jié)果：
　　LO2細胞的UGT1A1蛋白經(jīng) SAMe誘導后合成和分泌增加，其中以濃度為0.5mmol/L組最為明顯，該組經(jīng)SAMe誘導24h后細胞的UGT1A1蛋白合成和分泌開始增高（49.18±10.16或526.18±5.21，P<0.05），48h達到高峰（130.69±9.23或1278.22±9.38，P<0.05），72h后明顯下降（28.25±9.4