腫瘤相關抗原的抗體檢測在原發(fā)性肝癌診斷中的價值.pdf

1、背景和目的：原發(fā)性肝癌是全球常見的惡性腫瘤之一,特別是在亞洲和非洲。全球每年有60萬人死于肝癌,我國每年有約32萬人死于肝癌,其發(fā)病率和死亡率均占惡性腫瘤中的第二位。肝癌患者往往在確診后一年內死亡,如此高的發(fā)病率和死亡率歸因于缺乏一種早期診斷的方法。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤病人血清中存在有各種類型的抗細胞自身抗原的抗體,這些與腫瘤發(fā)生有關的抗原被稱為腫瘤相關抗原(tumor-associated antigen,TAA),對血清中存在的抗

2、TAA抗體的檢測可以用于肝癌的早期診斷和預后評價。肝癌的顯著特征多由一些肝炎及肝硬化病人發(fā)展而來,研究者發(fā)現(xiàn)在一些從慢性肝炎、肝硬化而逐漸發(fā)展為肝癌的患者血清中,出現(xiàn)了在癌前病變前期沒有的自身抗體。這就為肝癌的早期診斷提供了一個新的思路,但是單個抗體的靈敏度往往不高,有學者提出一個全新的概念,即把多種與腫瘤發(fā)生密切相關抗原的抗體系統(tǒng)結合起來綜合考慮和評價其在腫瘤發(fā)生中的意義。
　　材料與方法：1.樣本采集:研究對象共268例,分為

3、兩組,肝癌組115例,所有115例肝癌血清標本均采集自首次到醫(yī)院就診,并經(jīng)組織病理學確診、沒有經(jīng)過任何化療和放療的肝癌患者;正常組153例,正常對照均為進行健康體檢并證實沒有任何腫瘤相關疾患的健康成人。2.應用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測115例原發(fā)性肝癌患者血清和153例正常人血清中的14種抗TAA(針對14個抗原Calnuc、CyclinE、CDK2、cIAP、RalA、p62、p53、CyclinB1、Koc、Impl、

4、survivin、CyclinD1、p16、C-myc)的自身抗體,利用流行病學方法對檢測結果的真實性進行評價。3.對本實驗室經(jīng)異體血清篩選出來的在肝癌患者、肝炎以及正常人中有差別的基因AHSG基因進行克隆。
　　結果一種抗原單獨檢測結果:1.大多數(shù)指標的靈敏度偏低,最高的為32.2％,但是肝癌患者抗體陽性率明顯高于正常人。2.具有乙肝的肝癌患者、無肝炎(無乙肝和丙肝,簡稱無肝炎)的肝癌患者和正常人之間,靈敏度具有顯著差異,具有乙

5、肝的肝癌患者的抗體陽性率明顯高于無肝炎肝癌患者和正常人的陽性率?？乖?lián)合檢測結果:1.14種TAA進行不同的組合,逐漸增加抗原數(shù)目進行檢測,結果隨著檢測抗體的增多,靈敏度顯著升高,抗原數(shù)目增加到8種(CyclinE、Koc、Impl、cIAP、p62、p16,Cyclin B1和Calnuc)時,靈敏度達到最高,本實驗中,8種抗原組合為最適宜組合。聯(lián)合8種TAA檢測的靈敏度增加到72.2%,特異度達到91.2%,陽性似然比為8.49,陰

6、性似然比為0.304,陽性預測值為86.5%,陰性預測值為81.4%,說明8種TAA聯(lián)合檢測肝癌的診斷價值較高;Kappa值為0.65,提示該試驗的診斷結果與真實值之間中度一致。2.8種抗原聯(lián)合檢測在男女肝癌患者之間陽性率不存在差別。按年齡把肝癌患者分為三層,小于50歲,50歲到60歲之間,大于60歲,進行TAA聯(lián)合檢測,差別具有統(tǒng)計學意義,大于60歲組肝癌患者抗體陽性率最高。3.8種TAA聯(lián)合檢測和AFP檢測肝癌之間差別無統(tǒng)計學意義,

7、但是在AFP檢測陰性的13例肝癌患者中,TAA檢測有10例為陽性,把TAA檢測和AFP檢測進行并聯(lián)篩檢,肝癌檢出率91.0%(32/35),遠遠高于AFP62.99%(22/35)和TAA的65.7%(23/35),且并聯(lián)檢測和AFP、TAA單獨檢測差別具有統(tǒng)計學意義。AHSG基因克隆結果:1.含AHSG基因的重組質粒pMD18-T-Ahsg(簡稱pTA),經(jīng)雙酶切后得到克隆載體片段(2.7kb)和目的基因AHSG片段(1104bp),

8、特異PCR可擴增出1104bp的AHSG基因片段,證實AHSG基因的重組克隆質粒構建成功。經(jīng)測序,AHSG基因全長1104bp,編碼由367個氨基酸殘基組成的肽鏈,蛋白質分子量為39KD,將AHSG測序結果采用NCBI的網(wǎng)上序列分析軟件BLAST進行cDNA序列的同源性比較、分析,結果顯示,發(fā)現(xiàn)有7個核苷酸差異,同源性為99%。
　　結論：1.用8種TAA抗體組合檢測肝癌具有較高的真實性,可作為現(xiàn)場高危人群篩檢和臨床中肝癌診斷的一