TRPC6在足細(xì)胞的表達(dá)及其與足細(xì)胞損傷修復(fù)相關(guān)性研究.pdf

1、目的：足細(xì)胞的裂孔隔膜(slit diaphragm，SD)是腎小球?yàn)V過屏障的關(guān)鍵組成部分，新近發(fā)現(xiàn)的裂孔隔膜蛋白[1,2]瞬時(shí)受體電位陽離子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel 6，TRPC6)是一個(gè)非選擇性陽離子通道蛋白，它與Nephrin、Podocin等重要的裂孔隔膜分子共同組成一個(gè)信號傳導(dǎo)復(fù)合物(signaling complex)以維持足突及裂孔隔膜結(jié)構(gòu)和功能的完

2、整性。本文旨在探討TRPC6蛋白在小鼠足細(xì)胞系MPC5(mouse podocyte clone 5，MPC5)的表達(dá)及其表達(dá)變化與足細(xì)胞損傷、修復(fù)的相關(guān)性。 方法： 1、條件永生型小鼠足細(xì)胞系MPC5培養(yǎng)：根據(jù)文獻(xiàn)[3]將復(fù)蘇MPC5細(xì)胞，于33℃中增殖培養(yǎng)，平均3～4天達(dá)80％以上融合傳代。換于37℃中培養(yǎng)，10～14天分化為成熟，此時(shí)為分化態(tài)MPC5，用于實(shí)驗(yàn)； 2、通過反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR

3、)、免疫蛋白印跡(Western blotting)檢測TRPC6在分化態(tài)MPC5的表達(dá)；　　3、TRPC6與足細(xì)胞骨架蛋白關(guān)系研究：將分化態(tài)MPC5分兩組，正常對照組(組1)不做任何處理，細(xì)胞松解素處理組(組2)加細(xì)胞松解素D(cytochalasin D) (2.5 μmol/mL)作用6小時(shí)，用Western blotting方法檢測兩組TRPC6的表達(dá)量： 4、TRPC6與足細(xì)胞損傷及修復(fù)研究：建立正常對照組，嘌呤霉素

4、核苷酸(PAN)腎病足細(xì)胞模型組，地塞米松干預(yù)組(0.01 μmol/L，7d)，卡托普利干預(yù)組(10μmol，12 h、24 h、48 h、72 h)，全反式維甲酸(ATRA)干預(yù)組(0.2 μmol，24 h、48 h、72 h、96 h、120 h)，用Western blotting方法檢測各組TRPC6的表達(dá)量。 結(jié)論： 1、從mRNA水平及蛋白水平證實(shí)，在分化態(tài)MPC5能正常表達(dá)TRPC6基因和蛋白質(zhì)。