益氣化瘀清熱方治療難治性腎病的臨床觀察及其對(duì)足細(xì)胞表達(dá)TRPC6、Podocalyxin的影響.pdf

1、本論文分為臨床觀察、實(shí)驗(yàn)研究?jī)蓚€(gè)部分。
　　臨床觀察目的：回顧性調(diào)查分析益氣化瘀清熱方治療兒童難治性腎病綜合征臨床療效。
　　方法：采用回顧性縱向?qū)Ρ妊芯糠治?013年7月至2014年7月之間在河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院及鄭州市兒童醫(yī)院治療的60例難治性腎病綜合征患兒，觀察其在治療前及治療后2周、4周、8周、12周、24周及36周的24小時(shí)尿蛋白定量（24h-UTP）、總膽固醇（CHOL）、血漿白蛋白（ALB）、活化部分凝血酶

2、時(shí)間（APTT）、凝血酶原時(shí)間（PT）、纖維蛋白原（FIB）、疾病復(fù)發(fā)率及血常規(guī)、肝腎功相關(guān)安全性指標(biāo)的變化，通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析了解兩組之間的差異。
　　結(jié)果：治療組總有效率86.7％，對(duì)照組總有效率70.0%，兩組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。并且治療組復(fù)發(fā)率比對(duì)照組低（P<0.05）。36周治療結(jié)束后，治療組的尿蛋白定量和總膽固醇下降程度、血清白蛋白升高程度及凝血改善情況均優(yōu)于對(duì)照組（P<0.05）。
　　結(jié)論：益氣化瘀清

3、熱方可改善患兒24小時(shí)蛋白定量、血漿白蛋白、血脂及高凝血情況，減少兒童難治性腎病綜合征的復(fù)發(fā)率，提高臨床總有效率，臨床觀察未見(jiàn)不良反應(yīng)。
　　實(shí)驗(yàn)研究目的：觀察益氣化瘀清熱方及其拆方對(duì)小鼠足細(xì)胞表達(dá)瞬時(shí)受體電位陽(yáng)離子通道蛋白6（TRPC6）、podocalyxin的表達(dá)影響，探討這些中藥對(duì)嘌呤霉素氨基核苷（PAN）損傷足細(xì)胞的作用機(jī)理。
　　方法：應(yīng)用 PA N刺激體外培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞，形成 PA N足細(xì)胞損傷模型，造模成功

4、后的足細(xì)胞隨機(jī)分為益氣組、化瘀組、清熱組、復(fù)方組、對(duì)照組、雷公藤組、模型組、空白組，采用 RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)各組血清對(duì)小鼠足細(xì)胞表達(dá) TRPC6、podocalyxin mRNA及蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1、RT-PCR結(jié)果示，TRPC6、podocalyxin在空白組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。①含藥血清作用24小時(shí)后，雷公藤組和清熱組在提高podocalyxin表達(dá)方面作用最強(qiáng)，

5、而其余各組的作用低于對(duì)照組；雷公藤組降低 TRPC6表達(dá)最強(qiáng)，其次為清熱組、化瘀組和復(fù)方組，益氣組作用最弱。②含藥血清作用48小時(shí)后，各含藥血清均能促使podocalyxin表達(dá)升高，其中復(fù)方組和雷公藤組表現(xiàn)最強(qiáng)，其次為化瘀組，益氣組和清熱組作用最弱；各含藥血清均能降低 TRPC6表達(dá)，且各組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。2、Western Blot結(jié)果示 TRPC6、podocalyxin蛋白表達(dá)在空白組與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

6、P<0.05）。①含藥血清作用24小時(shí)后，清熱組對(duì)升高podocalyxin蛋白表達(dá)作用最強(qiáng)，優(yōu)于復(fù)方組、清熱組、化瘀組（P<0.05）；各含藥血清均能降低 TRPC6蛋白表達(dá)，其中益氣組和化瘀組作用最強(qiáng)，優(yōu)于復(fù)方組和清熱組（P<0.05）。②各含藥血清作用48小時(shí)后，各組含藥血清均能促使 podocalyxin蛋白表達(dá)增高，其中復(fù)方組表達(dá)作用最強(qiáng)，其次為化瘀組，而益氣組和清熱組作用不明顯；各含藥血清均能降低 TRPC6蛋白高表達(dá)，復(fù)方

7、組作用最強(qiáng)，優(yōu)于益氣組、清熱組，而化瘀組作用最弱。
　　結(jié)論：1、益氣化瘀清熱方及其拆方均能升高podocalyxin mRNA和蛋白的表達(dá)，并降低TRPC6mRNA和蛋白的表達(dá)。2、當(dāng) PAN刺激24小時(shí)后，清熱組在升高podocalyxin mRNA及蛋白表達(dá)方面作用最強(qiáng)。當(dāng) PAN刺激48小時(shí)后，復(fù)方組在升高podocalyxin mRNA表達(dá)及蛋白表現(xiàn)最強(qiáng)，其次為化瘀組，益氣組和清熱組作用最弱。其中清熱組和復(fù)方組在不同時(shí)間