染料木黃酮后處理對人胃黏膜上皮細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的: 研究染料木黃酮后處理對人胃黏膜上皮細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護作用并初步探討其機制。
　　 方法: 體外培養(yǎng)人胃黏膜上皮細(xì)胞系（GES-1），建立缺氧/復(fù)氧損傷模型。實驗時細(xì)胞隨機分為五組：常氧對照組（N）、缺氧/復(fù)氧組（H/R）、染料木黃酮genistein后處理組（GP）、辣椒素受體拮抗劑capsazepine+染料木黃酮后處理組（C+GP）、DMSO溶劑對照組（DM）。采用MTT法檢測細(xì)胞活力，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡百

2、分率，Hoechst33258熒光染色觀察凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化，可見光分光光度法測定胞漿總超氧化物歧化酶（T-SOD）和丙二醛（MDA）水平，免疫印跡法測定胞漿CGRP、Bcl-2、Bax的表達，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測CGRP的表達。
　　 結(jié)果: MTT檢測顯示，各組細(xì)胞存活率分別為100.0％±0％、51.4％±4.1％、66.7％±2.0％、56.1％±2.8％和50.7％±2.4％。染料木黃酮后處理可以保護缺氧/復(fù)氧時的細(xì)

3、胞，GP與H/R比較，細(xì)胞存活率明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。辣椒素受體拮抗劑能夠翻轉(zhuǎn)染料木黃酮后處理的保護效應(yīng)，C+GP與GP比較，細(xì)胞存活率降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。流式細(xì)胞儀分析顯示，各組細(xì)胞凋亡率分別為2.28％±0.44％、12.17％±2.15％、5.40％±1.22％、10.43％±1.37％ 和11.02％±2.19％。GP與H/R比較，細(xì)胞凋亡率明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01

4、）。C+GP與GP比較，細(xì)胞凋亡率升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。Hoechst33258熒光染色顯示，H/R凋亡陽性細(xì)胞增多，GP凋亡細(xì)胞減少，C+GP凋亡細(xì)胞增多?？梢姽夥止夤舛确z測顯示，各組細(xì)胞T-SOD水平分別為32.43％ ± 2.79％, 22.38％ ± 1.63％, 28.76％ ± 1.58％, 23.65％ ± 1.07％ 和22.18％ ± 1.72％。MDA水平分別為分別為1.20％ ± 0.63％,

5、 3.47％ ± 1.03％, 1.27％ ± 0.46％, 2.71％ ± 0.39％ 和3.52％ ± 0.75％。Western blot檢測顯示，正常人胃黏膜上皮細(xì)胞表達降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）、Bcl-2和Bax；H/R與N比較，CGRP表達無變化，Bcl-2表達減少，Bax表達增加；GP與H/R比較，CGRP和Bcl-2表達增加，Bax表達減少；C+GP與GP比較，CGRP和Bcl-2表達減少，Bax表達增加。免疫細(xì)胞化