利用抗脫落凋亡A549細胞篩選腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及TC-1相關(guān)通路抑制劑對A549脫落凋亡影響.pdf

1、1994年Frisch SM報道了上皮細胞與細胞外基質(zhì)(ECM)分離后細胞發(fā)生程序性死亡（凋亡）的現(xiàn)象，并將其命名為“anoikis”，即脫落凋亡/失巢凋亡。這種特殊形式的凋亡意義在于避免正常脫落的上皮細胞經(jīng)脈管系統(tǒng)播散至其它臟器繼續(xù)生長。而惡性腫瘤細胞卻能打破這一正常的生理機制，使自身從原發(fā)部位脫落后不發(fā)生凋亡，而通過脈管系統(tǒng)遷徙到其它部位繼續(xù)生長，甚至適應(yīng)原本不適合原發(fā)部位正常組織生長的細胞外基質(zhì)環(huán)境，形成轉(zhuǎn)移瘤。這種惡性腫瘤細胞的

2、抗脫落凋亡現(xiàn)象，被廣泛認為是腫瘤轉(zhuǎn)移的重要原因。
　　脫落凋亡/抗脫落凋亡現(xiàn)象的發(fā)生是一個非常復(fù)雜的過程，涉及多種細胞事件以及多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。部分腫瘤細胞存在的抗脫落凋亡現(xiàn)象本質(zhì)是正常介導(dǎo)脫落凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑發(fā)生改變的結(jié)果。研究者通過制備腫瘤細胞懸浮細胞系，借以在體外模擬抗脫落凋亡現(xiàn)象，并與正常生長腫瘤細胞比較，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)整聯(lián)蛋白相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、死亡受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及細胞骨架等在細胞的抗脫落凋亡過程中發(fā)揮重要作用。原癌基因

3、ras、raf、rac和src的過表達，抑癌基因PTEN和p53的表達缺失亦參與此類細胞事件。但直至目前，關(guān)于脫落凋亡/抗脫落凋亡的機理仍缺乏系統(tǒng)的認識，細胞的多樣性以及腫瘤細胞的易突變性也使得不同的腫瘤細胞可能存在不同的抗脫落凋亡機制。
　　目的：應(yīng)用高侵襲性肺腺癌A549細胞系，分別在貼壁與懸浮兩種狀態(tài)下培養(yǎng)，檢測兩種不同生長狀態(tài)肺癌A549細胞系基因表達上的差異，旨在高通量地篩選肺癌抗脫落凋亡相關(guān)基因。并從中篩選肺癌轉(zhuǎn)移密切

4、相關(guān)的基因，為進一步研究肺癌轉(zhuǎn)移侵襲性提供數(shù)據(jù)。并驗證TC-1相關(guān)通路抑制劑對脫落凋亡影響。
　　方法：利用多聚羥乙基甲基丙烯酸樹脂（Poly-HEMA）處理培養(yǎng)皿，致細胞無法貼壁生長，建立抗脫落凋亡肺癌A549細胞系；利用北京博奧生物芯片公司的人類V2.0全基因組寡核苷酸微陣列芯片，檢測其與正常貼壁生長A549細胞的基因表達差異性，篩選與肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。利用Sigma-Aldrich公司TC-1基因相關(guān)通路抑制劑PD17607

5、4處理懸浮及貼壁培養(yǎng)A549細胞，觀察其對脫落凋亡/抗脫落凋亡的影響。
　　結(jié)果：得到表達差異的基因745個，最終篩選出38個與肺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的基因。其中相關(guān)基因TC-1通路抑制可明顯降低肺癌A549細胞抗脫落凋亡能力。
　　結(jié)論：成功建立抗脫落凋亡肺癌A549細胞系，篩選出轉(zhuǎn)移相關(guān)差異表達基因，并驗證篩選基因TC-1通路抑制確實可明顯降低肺癌A549細胞抗脫落凋亡能力。為進一步研究肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及其他相關(guān)研究提