睪丸間質(zhì)細胞-內(nèi)源性哇巴因的新來源.pdf

1、本文分三個部分進行探討。
　　第一部：SD大鼠睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度的比較
　　目的：比較SD大鼠的睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度。
　　方法：健康SD大鼠38只，體重200±20g，采用心臟采血獲取血清同時獲取雙側(cè)睪丸組織，并使用0.01mol/L的PBS進行睪丸勻漿獲取勻漿上清液。使用大鼠EO ELISA試劑盒檢測大鼠血清和睪丸勻漿中的哇巴因濃度。采用配對樣本t檢驗比較睪丸勻漿和血清中的哇巴因濃度。
　　

2、結(jié)果：大鼠血清中的哇巴因濃度為（1.88±0.63）ng/ml，睪丸勻漿中的哇巴因濃度為（2.56±0.53）ng/ml，經(jīng)配對樣本t檢驗，SD大鼠睪丸勻漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度（P<0.01）。
　　結(jié)論：SD大鼠睪丸勻漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度，說明睪丸組織中可能存在分泌哇巴因的細胞。
　　第二部分：精液參數(shù)正常男性精漿和血清中的哇巴因濃度的比較
　　目的：比較正常男性精漿和血

3、清中的哇巴因水平。
　　方法：按照人類精液檢驗與處理實驗室手冊第五版中關(guān)于正常精液質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)來收集27份正常精液參數(shù)的精液，并同時采集受試者的靜脈血5ml，分別獲取精漿和血清。采用人EO ELISA試劑盒檢測精漿和血清中的哇巴因水平。采用配對樣本t檢驗比較精漿和血清中的哇巴因濃度。
　　結(jié)果：正常精液參數(shù)的精漿中的哇巴因水平（2.69±0.23）ng/ml，血清中的哇巴因水平（2.41±0.17）ng/ml，經(jīng)配對樣本t檢驗

4、，正常精液參數(shù)的精漿中的哇巴因濃度要明顯高于血清中的哇巴因濃度（P<0.01）。
　　結(jié)論：正常精液參數(shù)的精漿中的哇巴因水平要高于血清中的哇巴因水平，說明精子所在的生精小管內(nèi)的哇巴因濃度要高于血清中哇巴因濃度。
　　第三部分：睪丸間質(zhì)細胞分泌哇巴因的探索性研究
　　目的：通過原代培養(yǎng)獲取SD大鼠睪丸間質(zhì)細胞，采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)睪丸間質(zhì)細胞，并在黃體酮的作用下檢測細胞上清液中的哇巴因濃度。
　　方法：選擇200±

5、20g的SD雄性大鼠3只，采用膠原酶I消化法、percoll密度梯度離心法消化并提純睪丸間質(zhì)細胞，采用3β-HSD染色法鑒定細胞的純度。細胞經(jīng)過換液傳代4-5次，細胞的純度和活力都達到最佳，細胞在無血清培養(yǎng)基中饑餓12h后，再在無血清的培養(yǎng)基和不同濃度的黃體酮的刺激下培養(yǎng)24h，檢測細胞上清液中的哇巴因濃度。
　　結(jié)果：經(jīng)過膠原酶I消化、percoll密度梯度離心獲取的睪丸間質(zhì)細胞，經(jīng)過培養(yǎng)傳代4-5次后細胞的純度達到90％以上。