轉(zhuǎn)檉柳LEA基因煙草耐鹽性分析.pdf

1、本研究是對(duì)轉(zhuǎn)檉柳LEA基因煙草當(dāng)代和子一代的耐鹽堿性進(jìn)行研究，從而驗(yàn)證LEA基因的功能，為通過(guò)基因工程手段培育抗逆植物提供基礎(chǔ)資料，研究結(jié)果如下： 在獲得的41株卡那抗性植株中選取10株生長(zhǎng)良好的轉(zhuǎn)基因煙草進(jìn)行分析，PCR檢測(cè)檢測(cè)全部為陽(yáng)性，初步證明LEA基因已經(jīng)整合到煙草基因組中。對(duì)其中8個(gè)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，證實(shí)了轉(zhuǎn)入的外源基因均能夠表達(dá)，但各轉(zhuǎn)基因株系外源基因的表達(dá)水平不盡相同，相對(duì)于內(nèi)標(biāo)基因GAPDH(

2、甘油醛-3-磷酸-脫氫酶)的表達(dá)水平為36.64～169.32之間。 對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草當(dāng)代(T0)10個(gè)株系分別進(jìn)行了耐鹽性研究，結(jié)果表明：轉(zhuǎn)基因煙草當(dāng)代(T0)組培苗在230mmol/LNaCl濃度下能夠正常生長(zhǎng)，在該濃度條件下，培養(yǎng)20d后分別對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢煵莸脑鲋?、生根及鹽害指數(shù)等進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果顯示：10個(gè)轉(zhuǎn)基因株系的生根率在40％～60％之間，而對(duì)照為30％；轉(zhuǎn)基因煙草各株系的增重高于對(duì)照的45.58％～79.

3、08％；各轉(zhuǎn)基因株系鹽害指數(shù)平均值低于對(duì)照的37.6％，其中T0-17低于對(duì)照的60％。分別對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草當(dāng)代(T0)盆栽苗進(jìn)行240mmol/L和340mmol/L的NaCl脅迫，結(jié)果也表明：各轉(zhuǎn)基因株系的耐鹽性均高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢煵荨?對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草當(dāng)代(T0)7個(gè)株系分別進(jìn)行了NaHCO3抗性研究，對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草的生根率、堿害指數(shù)、SOD活性、POD活性和相對(duì)電導(dǎo)率的變化進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明：當(dāng)NaHCO3濃度為30mmol/L時(shí)

4、，轉(zhuǎn)基因煙草堿害指數(shù)達(dá)到50％左右，且保持有10～30％左右生根率，而對(duì)照煙草受害程度較大，已經(jīng)不能生根。且在此濃度下，SOD活性、POD活性均達(dá)到最大值，相對(duì)電導(dǎo)率的測(cè)定結(jié)果也表明各轉(zhuǎn)基因株系的NaHCO3抗性均高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢煵荨?將T0代得到的轉(zhuǎn)基因煙草種子(T1代)播種于含100mg·L-1卡那霉素的1/2MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)5d后，對(duì)6個(gè)轉(zhuǎn)基因株系的綠白苗之比進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因煙草T1-33、T1-6和T1-22

5、的綠色苗與白化苗比例基本符合(22-1)∶1，T1-42株系的綠白苗比例是15.1，分離規(guī)律符合(24-1)∶1。 選取T1代的6個(gè)卡那霉素抗性株系進(jìn)行PCR檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果全部為陽(yáng)性，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：6個(gè)轉(zhuǎn)基因株系LEA基因相對(duì)于內(nèi)標(biāo)基因GAPDH的表達(dá)水平為132.17～242.88，證實(shí)了外源基因能夠轉(zhuǎn)錄。 對(duì)轉(zhuǎn)LEA基因煙草T1代的6個(gè)株系分別進(jìn)行不同濃度NaCl脅迫處理，分析了NaCl脅迫下轉(zhuǎn)基因

6、煙草的生長(zhǎng)量、根系的發(fā)育及鹽害程度。結(jié)果顯示，各轉(zhuǎn)基因煙草T1代組培苗在150mmol·L-1的NaCl培養(yǎng)基上根系生長(zhǎng)良好，平均增重是非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏?.72倍，平均高生長(zhǎng)是非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏?.51倍，鹽害指數(shù)低于或等于50％，而非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢煵軹1代組培苗生長(zhǎng)緩慢、根系幾乎不能生長(zhǎng)發(fā)育，鹽害指數(shù)達(dá)65％，表明LEA基因的導(dǎo)入同樣提高了T1代煙草的耐鹽性。證明了外源LEA基因能夠在轉(zhuǎn)基因煙草中穩(wěn)定遺傳，檉柳LEA基因的表達(dá)可提高煙草耐鹽堿