高同型半胱氨酸血癥聯(lián)合球囊損傷致兔動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型建立的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用高蛋氨酸飼料致兔高同型半胱氨酸血癥及結(jié)合球囊損傷腹主動(dòng)脈致動(dòng)脈粥樣硬化模型的相關(guān)研究，為進(jìn)一步進(jìn)行藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br>　　方法：
　　1．實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：健康雄性新西蘭大耳白兔32只，體重2.0-2.5 kg，購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
　　2．建立模型：使用2％的L-蛋氨酸飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔，2周后再以球囊損傷造成腹主動(dòng)脈內(nèi)膜損傷，喂養(yǎng)12周來(lái)建立高同型半胱氨酸血癥及動(dòng)脈粥樣硬化模型。
　　3．

2、動(dòng)物分組：將32只新西蘭大耳兔隨機(jī)分成4組，正常對(duì)照組；球囊損傷組；蛋氨酸喂養(yǎng)組；模型組（2％L-蛋氨酸飼料+腹主動(dòng)脈球囊損傷）。
　　4．觀察指標(biāo)：①四個(gè)組分別于0周、2周及12周時(shí)抽血測(cè)定血同型半胱氨酸濃度；②四個(gè)組分別于12周末時(shí)抽血測(cè)定血脂（即TG、Tc、LDL-c、HDL-c、Ox-LDL）濃度；③四個(gè)組分別于12周末時(shí)抽血測(cè)定 MMP-9及NF-κB的濃度；④觀察四個(gè)組12周末時(shí)腹主動(dòng)脈大體標(biāo)本油紅Ｏ染色結(jié)果；⑤觀察四

3、個(gè)組12周末時(shí)腹主動(dòng)脈蘇木精-伊紅染色結(jié)果。
　　結(jié)果：給予2％L-蛋氨酸顆粒飼養(yǎng)2周后，兔血清同型半胱氨酸水平明顯增高(P<0.05)，此時(shí)予腹主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷，12周后在兔損傷血管段形成了特有的動(dòng)脈粥樣硬化病變，并且同時(shí)相對(duì)于單純給予腹主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷及2％L-蛋氨酸顆粒飼料的兔粥樣斑塊面積更大、內(nèi)膜損傷更嚴(yán)重。
　　1．四個(gè)組分別于0周、2周及12周時(shí)的血同型半胱氨酸濃度：實(shí)驗(yàn)0周時(shí)，32個(gè)樣本中血清 Hcy符合正

4、態(tài)分布，正常值范圍為4.03-15.11μmol/L，各組之間 Hcy差異無(wú)顯著性意義(P>0.05)；2周時(shí)，蛋氨酸組和模型組的Hcy水平較正常組和損傷組顯著升高(P<0.05)；12周時(shí)，各組 Hcy水平與2周時(shí)相當(dāng)(P>0.05)。
　　2．四個(gè)組分別于12周時(shí)血清動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)因子的測(cè)量：與對(duì)照組比較，蛋氨酸組和模型組兔血清 Ox-LDL值顯著升高(P<0.05)，蛋氨酸組和模型組兔血清 Ox-LDL值具有顯著性差異(P

5、<0.05)，而損傷組兔子血清 Ox-LDL未顯著升高（P>0.05）。與對(duì)照組比較，各組兔子血清 MMP-9，VCAM-1均無(wú)顯著性升高（P>0.05）。
　　3．半定量檢測(cè)各組兔腹主動(dòng)脈組織中MMP-9，NF-κB水平：與對(duì)照組比較，球囊損傷組、蛋氨酸組、模型組兔腹主動(dòng)脈組織中MMP-9顯著升高(P<0.05)，三組之間比較具有顯著性差異(P<0.05)。球囊損傷組、蛋氨酸組、模型組兔子腹主動(dòng)脈組織中NF-κB顯著升高(P<0

6、.05)，三組之間比較具有顯著性差異(P<0.05)。
　　4．各組兔腹主動(dòng)脈粥樣斑塊形成情況（油紅 O染色）：正常組兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜表面光滑，油紅O不著色。球囊損傷組兔可見內(nèi)皮剝脫和內(nèi)膜增生相間，以血管分支開口處尤為明顯，表面無(wú)油紅O著色。蛋氨酸組兔腹主動(dòng)脈表面有小面積紅染的脂肪斑塊形成，粥樣斑塊面積占4.6％左右。模型組兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜表面不平，可見鮮紅色脂質(zhì)條紋和斑塊，面積9.6％左右。蛋氨酸組與模型組粥樣斑塊面積差異具有顯著性

7、(P<0.05)。
　　5．各組兔腹主動(dòng)脈病理改變（H.E染色×100）：對(duì)照組兔腹主動(dòng)脈內(nèi)皮平整，血管平滑肌細(xì)胞排列整齊。球囊損傷組兔腹主動(dòng)脈內(nèi)膜增厚，中層 VSMC排列紊亂，內(nèi)膜/內(nèi)中膜厚度百分比29.7％左右。蛋氨酸組兔子內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜/內(nèi)中膜厚度百分比32.5％左右。模型組內(nèi)膜增厚，內(nèi)膜/內(nèi)中膜厚度百分比43.1％左右。蛋氨酸組與模型組的內(nèi)膜/內(nèi)中膜厚度百分比差異具有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1

8、．采用高蛋氨酸顆粒飼料喂養(yǎng)新西蘭大耳白兔2周可形成高同型半胱氨酸血癥，其濃度和12周時(shí)相當(dāng)。
　　2．球囊損傷腹主動(dòng)脈可啟動(dòng)并形成動(dòng)脈粥樣硬化，但僅能形成纖維斑塊，即通常所說的硬斑塊，而聯(lián)合高同型半胱氨酸血癥可導(dǎo)致脂肪斑塊，即通常所說的軟斑塊。
　　3．高同型半胱氨酸血癥為致兔動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。
　　4．高同型半胱氨酸血癥和球囊損傷腹主動(dòng)脈兩種因素共同作用可造成動(dòng)脈粥樣硬化軟斑塊，建模周期較短，如果實(shí)驗(yàn)時(shí)

9、間延長(zhǎng)至3－6月，可形成更為典型的大面積軟斑塊模型。
　　5．本實(shí)驗(yàn)制作的動(dòng)物模型可以作為傳統(tǒng)藥物和轉(zhuǎn)基因藥物干預(yù)高同型半胱氨酸血癥所致軟斑塊的模型。
　　6．兔高同型半胱氨酸血及腹主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)是引起動(dòng)脈粥樣硬化的重要機(jī)制。
　　7．兔高同型半胱氨酸血及腹主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷引起的血管重塑是引起動(dòng)脈粥樣硬化的重要機(jī)制。
　　8．兔高同型半胱氨酸血及腹主動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷引起的內(nèi)皮損傷是引起動(dòng)脈