B7-H分子在人腸癌腫瘤微環(huán)境表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制.pdf

1、本文對B7-H分子在人腸癌腫瘤微環(huán)境表達(dá)的臨床意義及作用機(jī)制進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　 第一部分：協(xié)同刺激分子B7-H1在人結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其臨床意義。
　　 目的：檢測結(jié)直腸癌組織中負(fù)性協(xié)同刺激分子B7-H1的表達(dá),T細(xì)胞及其亞群的浸潤情況,分析其表達(dá)與腸癌臨床病理因素及患者生存時(shí)間的關(guān)系,探討B(tài)7-H1的表達(dá)在腸癌演進(jìn)過程中的意義,進(jìn)而探討其相關(guān)臨床意義。
　　 方法：收集112例手術(shù)切除的結(jié)直

2、腸癌組織和10例癌旁良性切端組織,整理其病理資料及生存時(shí)間；運(yùn)用免疫組織化學(xué)法檢測B7-H1的表達(dá)與T淋巴細(xì)胞及其亞群的浸潤,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析B7-H1的表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后程度及CD3+T、CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤程度之間的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示,在112例結(jié)直腸癌組織中,B7-H1高表達(dá)58例,低表達(dá)54例,高表達(dá)率為51.8％；而正常腸組織幾乎不表達(dá)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明,B7-H1的表達(dá)水平與腫瘤部位和D

3、uke's分期密切相關(guān)(P<0.05),而與其他病理參數(shù)無關(guān)；CD3+T細(xì)胞浸潤程度與B7-H1分子表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.001),而CD8+T細(xì)胞浸潤程度與其無關(guān)；生存分析顯示,B7-H1表達(dá)水平與腸癌患者總體生存率呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；此外,CD3+T細(xì)胞的浸潤程度與患者預(yù)后呈正相關(guān)(P<0.05),而CD8+T細(xì)胞的浸潤程度與患者預(yù)后無關(guān)。
　　 結(jié)論：負(fù)性協(xié)同刺激分子B7-H1在人結(jié)直腸癌組織中異常高表達(dá),參與腫

4、瘤的進(jìn)展。B7-H1可能通過下調(diào)T細(xì)胞的浸潤,進(jìn)而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤免疫應(yīng)答,參與腸癌腫瘤免疫逃逸。對B7-H1分子的檢測在結(jié)直腸癌診斷和預(yù)后判斷中具有一定的臨床價(jià)值。
　　 第二部分：腫瘤B7-H1信號(hào)促進(jìn)誘導(dǎo)產(chǎn)生調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。
　　 目的：分析腸癌患者外周血及組織中T細(xì)胞及其亞群的浸潤情況和B7-H1分子的表達(dá)情況的關(guān)系；通過構(gòu)建腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株,探討B(tài)7-H1信號(hào)對腫瘤浸潤T淋巴細(xì)胞亞群的作用機(jī)制。
　　

5、 方法：用淋巴細(xì)胞分離液分離腸癌患者外周血及組織,收集外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)、組織中的浸潤淋巴細(xì)胞(TILs)和腫瘤細(xì)胞；通過免疫熒光標(biāo)記法檢測并分析T細(xì)胞及其亞群；分析腫瘤組織B7-H1分子的表達(dá)與浸潤Tregs的相關(guān)性。運(yùn)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法構(gòu)建腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株SW480／B7-H1和SW480／Mock,將其與CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng),運(yùn)用免疫熒光標(biāo)記法(FCM)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EIJSA)分別檢測Fregs及其細(xì)胞因子TGF-β

6、和IL-10的分泌情況,探討B(tài)7-H1信號(hào)對Tregs的誘導(dǎo)作用。
　　 結(jié)果：免疫熒光標(biāo)記法結(jié)果顯示,腸癌患者組織中浸潤C(jī)D3+T細(xì)胞占浸潤淋巴細(xì)胞總數(shù)的67.1％,其中CD4+T／CD8+T的比值出現(xiàn)倒置,且CD4+CD25+Treg細(xì)胞的數(shù)量較健康人外周血顯著上升。此外,B7-H1高表達(dá)的組織中CD4+CD25+CD103+Tregs細(xì)胞的浸潤數(shù)量較B7-H1低表達(dá)的組織顯著增加。體外實(shí)驗(yàn)也表明,腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞株SW480