利用天然anti-Rhamnose抗體增強(qiáng)機(jī)體對腫瘤細(xì)胞的識別與殺傷.pdf

1、文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，人的血清中有含量豐富的糖鏈天然抗體，如anti-α-Gal、anti-Rhamnose、 anti-Forssman(GalNAcα1-3GalNAcβ)、 anti-Mamnose、anti-GalNAc等。近年來，對于anti-α-Gal抗體的研究比較多，該抗體能專一性識別Galα(1-3)Galβ（1-4)GlcNAc-R糖表位。Galili.U等圍繞anti-α-gal抗體和α-Gal表位的特異結(jié)合原理，針對含有α-G

2、al表位的化合物在疾病治療方面進(jìn)行一系列的實(shí)驗(yàn)。例如合成α-Gal流感疫苗和α-Gal-HIV gp120疫苗，以提高疫苗的免疫原性;制備含有α-Gal表位的腫瘤細(xì)胞用于癌癥治療等。Newlink公司發(fā)明的HyperAcute（R）免疫治療技術(shù)，即利用自體或異體腫瘤細(xì)胞，通過逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染α-1，3GalT，得到有α-Gal表位的腫瘤細(xì)胞，用于腫瘤患者的手術(shù)后輔助治療。因此，我們設(shè)想通過不同方法使腫瘤細(xì)胞表面連有Rhamnose，人

3、體大量的天然anti-Rhamnose抗體就會識別Rhamnose并與其結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，一方面，抗體的Fc段與APC的FcγR結(jié)合，增強(qiáng)APC對腫瘤細(xì)胞的識別與吞噬，引發(fā)針對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞免疫反應(yīng)，打破免疫耐受。另外，抗體的Fc段與血清中補(bǔ)體C1q結(jié)合活化補(bǔ)體系統(tǒng)，通過級聯(lián)激活反應(yīng)，激活C3b，沉積在腫瘤細(xì)胞表面，隨后轉(zhuǎn)化為iC3b，促進(jìn)膜攻復(fù)合物的形成，引起腫瘤細(xì)胞溶解，產(chǎn)生CDC效應(yīng)。
　　 第二章中我們合成了糖肽Rh

4、amnose-RGD，其中的RGD能和腫瘤表面過量表達(dá)的整合素αvβ3特異性結(jié)合，將Rhamnose攜帶至腫瘤細(xì)胞表面。該章為anti-Rhamnose抗體在腫瘤免疫治療的應(yīng)用提供參考價值。
　　 鼠李糖脂(Rhamnolipid)是由假單胞菌或伯克氏菌類產(chǎn)生的一種陰離子生物表面活性劑。其親水基團(tuán)一般由1～2分子的鼠李糖環(huán)構(gòu)成，憎水基團(tuán)則由1～2分子具有不同碳鏈長度的脂肪酸構(gòu)成。我們利用羧基活化劑TSTU可以將鼠李糖脂脂肪酸鏈的

5、末端羧基活化，生成Ⅳ-琥珀亞胺活潑酯，與腫瘤細(xì)胞表面蛋白的氨基反應(yīng)，二者形成穩(wěn)定的酰胺鍵，從而將鼠李糖脂連接到腫瘤細(xì)胞表面。
　　 第三章中我們利用硅膠柱純化得到單鼠李糖脂(R1)和雙鼠李糖脂(R3)的混合物。根據(jù)親和層析原理，純化得到人anti-Rhamnose IgG抗體，并且制備了FITC標(biāo)記anti-Rhamnose IgG抗體。另外，我們合成Rhamnolipid的活化形式Rhamnolipid-TSTU。利用流式細(xì)胞