穩(wěn)定表達(dá)LBH基因前列腺癌PC-3M細(xì)胞株的建立及其對PC-3M細(xì)胞增殖和遷移的影響.pdf

1、前列腺癌的防治是泌尿外科領(lǐng)域的一個重要課題。癌基因、抑癌基因的突變、缺失、異位等引起的細(xì)胞周期失控往往可以導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。LBH(limb-bub and heart)基因是前列腺癌中的表達(dá)下調(diào)基因，免疫組化結(jié)果顯示LBH基因在一些前列腺癌組織中的表達(dá)水平明顯低于正常的前列腺上皮組織。為探討LBH基因?qū)η傲邢侔┑淖饔茫狙芯窟x取LBH低表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞系PC-3M，擬通過慢病毒感染構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)LBH的前列腺癌細(xì)胞株，初步探討LBH基因

2、對前列腺癌PC-3M細(xì)胞增殖和遷移的影響及其分子機制。
　　目的:以低表達(dá)LBH基因的人前列腺癌細(xì)胞PC-3M為模型，構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)LBH基因的前列腺癌PC-3M-LBH細(xì)胞株，初步探討LBH基因?qū)C-3M細(xì)胞增殖、遷移的影響及其可能涉及的分子機制。
　　方法:
　　1.構(gòu)建表達(dá)LBH基因的慢病毒載體并包裝慢病毒，用慢病毒感染人前列腺癌 PC-3M細(xì)胞后，經(jīng)嘌呤霉素篩選建立穩(wěn)定表達(dá) LBH基因的PC-3M-LBH細(xì)胞株

3、；
　　2.采用CCK-8法和Transwell分別檢測細(xì)胞的增殖和遷移能力，分析LBH基因?qū)C-3M細(xì)胞增殖和遷移能力的影響；
　　3.流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry)確定LBH基因表達(dá)前后前列腺癌細(xì)胞PC-3M細(xì)胞周期的變化；
　　4.通過實時熒光定量PCR、Western Blot技術(shù)檢測基因mRNA及蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.成功構(gòu)建了表達(dá)LBH基因的重組慢病毒表達(dá)載體并包裝出了相

4、應(yīng)的慢病毒pLenti-LBH，通過篩選和傳代培養(yǎng)獲得了穩(wěn)定表達(dá)LBH基因的PC-3M-LBH細(xì)胞株；相對對照組細(xì)胞，其LBH基因的 mRNA和蛋白表達(dá)顯著上調(diào)；
　　2. LBH表達(dá)抑制了PC-3M細(xì)胞的增殖，在細(xì)胞接種后第5天，PC-3M-LBH細(xì)胞相對于PC-3M-NC細(xì)胞的生長抑制率為19.7％。Transwell實驗中，PC-3M-LBH組遷移細(xì)胞數(shù)為(50±10)，顯著低于PC-3M-NC組(250±16)和PC-3M

5、組(300±13)；
　　3.流式細(xì)胞儀檢測顯示：PC-3M-NC細(xì)胞中G1期和S期百分比分別為51.77%和25.89%，而PC-3M-LBH細(xì)胞組中G1期和S期的細(xì)胞分別占細(xì)胞總數(shù)的65.83%及16.77%，表現(xiàn)為細(xì)胞周期G1-S期阻滯；
　　4. qRT-PCR結(jié)果顯示：相對PC-3M-NC和PC-3M細(xì)胞，PC-3M-LBH細(xì)胞中Cyclin D1、Cyclin E2mRNA水平顯著下調(diào)。
　　結(jié)論：LBH基