無創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng)對大鼠心肌缺血再灌注損傷保護(hù)作用效應(yīng)動力學(xué)和線粒體功能的研究.pdf

1、目的：研究無創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng)(NDLIP)對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　方法：取健康雄性Wistar大鼠，體重250～290 g，隨機進(jìn)行如下分組：對照組，包括(1)假手術(shù)組(Sham組)：經(jīng)冠狀動脈左前降支(LAD)下穿線后，曠置；(2)缺血再灌注組(I/R組)：LAD實施30 min缺血，120 min再灌注；(3)心肌缺血預(yù)適應(yīng)組(MIPC組)：心臟LAD先行實施3次5min缺血/5 min再灌注后，立即對

2、LAD實施30 min缺血，120 min再灌注；(4)股動脈缺血預(yù)適應(yīng)組(FAIP)：左肢股動脈先行實施3次5 min缺血/5 min再灌注后，立即對LAD實施30 min缺血，120 min再灌注。
　　連續(xù)遠(yuǎn)端肢體缺血預(yù)適應(yīng)組，包括連續(xù)1天(1-d NDLIP)、3天(3-dNDLIP)、7天(7-d NDLIP)組，每組分別在遠(yuǎn)端肢體缺血預(yù)適應(yīng)后第1天、3天、5天進(jìn)行缺血再灌注損傷。
　　間斷遠(yuǎn)端肢體缺血預(yù)適應(yīng)組，包

3、括(1)1天NDLIP間隔1天組(1-dNDLIP+1 d INTV)，進(jìn)行7個循環(huán)；(2)1天NDLIP間隔2天組(1-d NDLIP+2dINTV)，進(jìn)行4個循環(huán)；(3)3天NDLIP間隔3天組(3-d NDLIP+3d INTV)，進(jìn)行3個循環(huán)；(4)3天NDLIP間隔5天組(3-d NDLIP+5d INTV)，進(jìn)行2個循環(huán)。監(jiān)測LAD30min缺血/120 min心功能、ECG變化；TTC染色法測定心肌梗死面積；ELISA法檢

4、測血清肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)、心肌肌鈣蛋白Ⅰ活性(cTnI)、心型脂肪酸結(jié)合蛋白(H-VABP)、糖原磷酸化酶同工酶B(GPBB)、心肌線粒體呼吸鏈酶復(fù)合物Ⅰ-Ⅳ；比色法測定心肌線粒體超氧化物岐化酶Mn-SOD活性、谷光甘肽過氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)含量；流式細(xì)胞儀檢測線粒體跨膜電位、活性氧(ROS)的變化；透射電鏡觀察線粒體形態(tài)變化；免疫印跡法分別檢測線粒體型硫氧還蛋白2(Trx2)及其還原酶(TrxP2

5、)；用實時PCR方法檢測Trx2mRNA、TrxR2 mRNA和miRNA21、1變化。
　　結(jié)果：
　　1.NDLIP對大鼠心肌I/R損傷后心臟生理功能變化的影響連續(xù)遠(yuǎn)端肢體缺血預(yù)適應(yīng)組：與I/R組比較，3-d NDLIP和7-d NDLIP后第1天組S-T段升高幅度降低(0.27±0.078和0.26±0.084 vs0.486±0.129mv，P<0.01)，室早(VPC)和室速(VT)的出現(xiàn)時間推遲(onset of

6、 VPC：11.09±2.61和11.59±3.42 vs6.40±1.95 min，P<0.01；onset of VT：11.46±1.84min和12.41±2.65 vs7.87±1.97min，P<0.01)，持續(xù)時間縮短(VPC：7.01±2.42和6.88±1.86 vs13.1±4.86min，P<0.01；VT：4.64±2.59和4.06±1.81 vs8.69±2.64min，P<0.01)，左室收縮壓(LVSP)

7、、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dt max)均有所改善(LVSP：100.38±11.75和97.63±5.78 vs85.38±13.17 mmHg，P<0.01；LVEDP：15.76±4.59和15.53±5.10 vs23.33±6.19 mmHg，P<0.01；dp/dt max：3047.25±678.20和3151.38±697.83 vs2415.88±363.46 mmHg，P<0.01)

8、，心肌保護(hù)作用與MIPC和FAIP組比較無明顯差別(ST：0.27±0.078和0.26±0.084mV，P<0.01；onsetof VPC：11.09±2.61和11.59±3.42 min，P<0.01；onset of VT：11.46±1.84和12.41±2.65 min，P<0.01；duration of VPC：7.01±2.42和6.88±1.86 min，P<0.01；duration of VT：4.64±2.5

9、9和4.06±1.81 min，P<0.01)；連續(xù)3天和7天NDLIP后第3天組與I/R組相比無明顯差別。
　　間斷遠(yuǎn)端肢體缺血預(yù)適應(yīng)組：1-d NDLIP+1d INTV組與MIPC和FAIP組有近似的心肌保護(hù)效果(ST：0.27±0.06 mV，P<0.01；onset of VPC：10.80±2.73min，P<0.01；onset of VT：11.35±2.77 min，P<0.01；duration ofVPC：7

10、.37±2.30 min，P<0.01；duration of VT：5.34±2.45 min，P<0.01)，其余各組與I/R組相比無顯著性差別。
　　2.NDLIP對大鼠心肌I/R后心肌梗死面積的影響與I/R組比較，3-d NDLIP和7-d NDLIP后第1天組、1-d NDLIP+1 d INTV組心肌梗死面積顯著減小(IS/AAR：21.2±5.4％，20.2±4.1％和22.8±8.5％vs34.3±6.6％，P<0

11、.01)，心肌損傷減輕，與MIPC和FAIP組保護(hù)作用相當(dāng)(IS/AAR：19.5±2.3％，19.6±4.6％，P<0.01)，其余各組與I/R組相比無顯著性差別。
　　3.NDLIP對大鼠心肌I/R后生化指標(biāo)的影響與I/R組比較，3-d NDLIP和7-d NDLIP后第1天組、1-d NDLIP+1 d INTV組血清CK-MB、cTnI、H-FABP、GPBB含量顯著減少(CK-MB：2411.90±280.80，2184

12、.20±362.50和2483.36±83.42 vs2845.29±142.05，P<0.01；cTnI：3.93±0.45，4.44±0.68和4.29±0.79 vs5.89±0.69，P<0.01；H-FABP：3.48±1.01，3.35±1.08，P<0.05和3.21±0.62 vs4.53±0.42，P<0.01；GPBB：31.28±3.99，31.00±3.38和30.28±4.72 vs36.33±2.58，P<0

13、.01)，與MIPC和FAIP組保護(hù)作用相當(dāng)(CK-MB：2392.24±181.77，2412.78±168.46。P<0.01；cTnI：3.46±0.80，4.40±0.83，P<0.01；H-FABP：3.28±0.93，3.72±0.62。P<0.01；GPBB：31.10±2.33，29.80±3.50，P<0.01)。
　　4.NDLIP對大鼠心肌I/R后ROS和線粒體功能的影響與I/R組比較，NDLIP、MIPC和

14、FAIP組ROS含量明顯減少(ROS：11.72±0.64，11.87±0.63和12.06±0.33 vs12.86±0.64，P<0.05)，MDA的生成顯著減少(MDA：4.04±0.83，3.95±0.88和3.79±0.83 vs6.23±1.44，P<0.01)：Mn-SOD和GSH-PX活性顯著增高(Mn-SOD：30.35±10.15.30.48±6.73和28.62±9.56 vs14.21±6.35，P<0.01；G

15、SH-PX：130.76±12.43，129.04±19.87和136.16±18.14 vs82.13±25.85，P<0.01)；線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ-Ⅳ的活性明顯升高(Ⅰ：8.78±2.57，8.81±2.26和8.35±1.87 vs2.30±1.40，P<0.05；Ⅱ：20.26±4.46，18.89±2.81和20.77±4.71 vs13.6±3.36.P<0.01；Ⅲ：120.10±29.64，117.07±27.12和

16、110.41±35.06 vs67.07±22.02，P<0.01和P<0.05；Ⅳ：39.42±14.20，75.61±14.15和77.44±16.61 vs58.06±15.80，P<0.05)；各預(yù)適應(yīng)組間相比未見顯著差別。
　　結(jié)論：
　　1.1-d NDLIP+1 d INTV和3-d NDLIP和7-d NDLIP后第1天組明顯降低大鼠心肌I/R所致ST-段抬高幅度，推遲缺血期VPC、VT出現(xiàn)時間，縮短持續(xù)時間

17、，升高LVSP和dp/dtmax，降低LVEDP，改善心功能，減少I/R所致心肌CK-MB、cTnI、H-FABP和GPBB的釋放，縮小心肌梗死面積，保護(hù)作用與MIPC和FAIP相當(dāng)，保護(hù)效應(yīng)至72h消失。結(jié)合臨床應(yīng)用前景，確定1-d NDLIP+1d INTV，5 min缺血/再灌，每天3個循環(huán)為最佳的方案。
　　2.NDLIP能減少大鼠心肌I/R所致ROS生成，降低MDA含量，減輕氧化損傷，升高線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ～Ⅳ的活性，