無創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng)對大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的： 研究無創(chuàng)性延遲肢體缺血預(yù)適應(yīng)（NDLIP）對大鼠腦缺血再灌注（I/R）損傷的保護(hù)作用。 方法： 健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為4組。（1）Sham組：頸正中切口，暴露左側(cè)頸總動脈、頸外動脈及頸內(nèi)動脈，游離左側(cè)頸總動脈，但不夾閉。（2）I/R組：建立大鼠MCAO模型，實施1h缺血/24h再灌注。（3）ECIP+I/R組：左側(cè)頸總動脈先行3次5min缺血/5min再灌注，隨后實施1h缺血/24h再灌注。（4

2、）NDLIP+I/R組：左后肢實施3次5min缺血/5mm再灌注，每天1次，連續(xù)3天，第4天建立MCAO模型，對腦實施1h缺血/24h再灌注。從神經(jīng)功能行為評分、能量代謝、腦細(xì)胞壞死和凋亡、抗氧化能力、血管內(nèi)皮功能等方面評價NDLIP的腦保護(hù)作用。大鼠實施1h缺血/24h再灌注后進(jìn)行行為評分觀察神經(jīng)功能變化；HPLC法測定皮層中ATP、ADP和AMP含量，并計算總腺苷酸（TAN）和能荷（EC）； TTC染色法測定腦梗死面積，HE染色觀察

3、腦細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，TUNEL法檢測皮層和海馬細(xì)胞凋亡，Real-time PCR法檢測皮層和海馬凋亡相關(guān)基因Fas、FasL mRNA表達(dá)水平，Western Blot法檢測皮層Fas、FasL蛋白含量；比色法測定腦組織髓過氧化物酶（MPO）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、錳-超氧化物歧化酶（Mn-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）、黃嘌呤氧化酶（XOD）活力，丙二醛（MDA）含量以及血清一氧化氮（NO）濃度；ELISA法檢

4、測血清ET-1含量和t-PA及PAl-1活力。 結(jié)果： 1NDLIP對大鼠腦I/R損傷后行為評分和能量代謝的影響 與I/R組相比、ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組行為評分降低（P<0.01）；ECIP+I/R組和ND LIP+I/R組皮層ATP（P<0.01）、ADP（P<0.01）和AMP（P<0.05）含量顯著升高，TAN（P<0.01）和EC（P<0.01）顯著升高。 2 NDLIP對大鼠腦

5、I/R損傷后細(xì)胞死亡和凋亡的影響 與I/R組比較，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組腦梗死面積縮小（P<0.05），MPO活性降低（P<0.01），大腦皮層細(xì)胞凋亡（TUNEL：P<0.01）和海馬細(xì)胞凋亡（TUNEL：P<0.01）降低。皮層細(xì)胞和海馬錐體細(xì)胞損傷明顯改善。 3 NDLIP對大鼠腦I/R損傷保護(hù)作用的凋亡機(jī)制 與I/R組相比，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組大鼠皮層組織Fas（P<

6、0.01）和FasL（P<0.01）mRNA水平明顯降低，海馬組織Fas（P<0.01）和FasL（P<0.01）mRNA水平明顯降低；ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組大鼠皮層組織Fas（P<0.05）和FasL（P<0.05）蛋白含量下降。 4 NDLIP對大鼠腦I/R損傷后抗氧化能力的影響 與I/R組相比，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組皮層T-SOD（P<0.01）、Mn-SOD（P<0.01）和G

7、SH-PX（P<0.01）及海馬T-SOD（P<0.01）和Mn-SOD（P<0.01）活力升高；皮層（P<0.01）和海馬（P<0.01）Mn-SOD mRNA表達(dá)升高；XOD活性（P<0.01）及皮層（P<0.01）和海馬（P<0.01）MDA含量降低。 5 NDLIP對大鼠腦I/R損傷前后血管內(nèi)皮功能的影響 缺血前，與I/R組比較，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組血清NO濃度升高（P<0.05），ET-1/

8、NO比值降低（P<0.05），各組間血清ET-1濃度未見差異。再灌注后，與I/R組比較，ECIP+I/R組和ND LIP+I/R組血清ET-1降低（P<0.01），NO濃度升高程度增加（P<0.01），ET-1/NO比值降低（P<0.05）。 6 NDLIP對大鼠腦I/R損傷前后纖溶系統(tǒng)的影響 缺血前，各組纖溶指標(biāo)無顯著性差異。再灌注后，與1/R組相比，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組t-PA活力升高（P<0.0

9、1），PAl-1活力降低（P<0.01）。與缺血前相比，I/R組，ECIP+I/R組和NDLIP+I/R組t-PA活力顯著降低（P<0.01），PAI-1活力顯著升高（P<0.01）。 結(jié)論： NDLIP可以降低大鼠腦I/R后的行為評分，改善大鼠神經(jīng)功能缺損；升高大鼠腦I/R后皮層組織的ATP、ADP和AMP含量，提高腺苷酸池水平，增加EC水平，改善腦I/R后腦組織的能量代謝，從而保護(hù)I/R損傷的大腦組織。NDLIP可

10、以縮小大鼠腦I/R損傷后的梗塞面積，改善腦細(xì)胞受損形態(tài)，顯著降低腦I/R損傷后的皮層和海馬的凋亡指數(shù)，其作用強(qiáng)度與ECIP相當(dāng)。NDLIP能夠顯著下調(diào)大腦皮層和海馬組織Fas、FasL mRNA水平，同時下調(diào)腦組織Fas、FasL蛋白表達(dá)水平，NDLIP減少腦I/R后腦組織凋亡的發(fā)生。NDLIP可以降低大鼠腦I/R后的腦組織MDA含量，降低腦組織中XOD活性，升高腦I/R后腦組織SOD、GSH-PX活性，增強(qiáng)腦I/R損傷后的抗氧化能力，

11、減輕過氧化損傷，提示其腦保護(hù)作用與抗氧化、清除自由基作用有關(guān)。NDLIP可增加基礎(chǔ)狀態(tài)下血清NO含量，明顯增加I/R損傷后NO含量，減少I/R損傷誘導(dǎo)的ET-1釋放增加，對基礎(chǔ)狀態(tài)下的ET-1含量不影響，因此，使基礎(chǔ)狀態(tài)和I/R損傷后ET-1/NO比值下降。此作用與增強(qiáng)腦組織抗氧化能力的作用、抑制凋亡相輔相成，共同介導(dǎo)NDLIP腦保護(hù)效應(yīng)。NDLIP能夠升高大鼠I/R后血清t-PA活力，降低大鼠I/R后血清PAI-1活力，改善纖溶/抗纖