E-,2-誘發(fā)大鼠原位和移植垂體形成催乳素瘤過程PRL基因調(diào)控序列突變差異性的分析.pdf

1、垂體催乳素瘤(prolactinoma，亦稱prolactin-producingtumor或prolactin-secretingtumor，簡稱PRL瘤)是內(nèi)分泌系統(tǒng)較常見的疾病之一，且發(fā)病人群以青壯年為主，主要表現(xiàn)為閉經(jīng)、泌乳以及巨大瘤體對中樞其它部位(如動眼神經(jīng)、外展神經(jīng))的壓迫，嚴重威脅著人們的身心健康。長期以來，盡管人們在臨床和基礎(chǔ)研究方面對PRL瘤的病因和發(fā)病機制都進行了不懈的探索，但至今關(guān)于PRL瘤的病因除繼發(fā)于下丘腦病

2、變外，是否可原發(fā)于腺垂體、以及其發(fā)病的分子機制尚未完全明了。本文擬采用同胞(Sibs)大鼠的垂體移植于腎囊，探討垂體PRL瘤可原發(fā)于腺垂體的可能性、并檢測原位與移植垂體PRL瘤形成過程PRL基因的表達以及分析其5’遠端調(diào)控序列突變的差異性，以揭示垂體PRL瘤的病因及其主要分子機制。具有重要的理論和臨床意義。 實驗過程中，首先我們建立了異體垂體移植于SD雄性大鼠腎囊內(nèi)的動物模型，即每只大鼠除具有本身的原位垂體外，在腎囊部位還有另一

3、異體垂體，經(jīng)E2作用120天后，經(jīng)形態(tài)學觀察和RT-PCR法檢測PRL基因表達等，證明了垂體PRL瘤原發(fā)于腺垂體的可能性。接著克隆了PRL基因5’遠端調(diào)控序列-1206～-1966間片段，測序分析原位與移植垂體PRL瘤形成過程，兩者PRL基因5’遠端調(diào)控序列突變的差異性，初步闡明原位垂體PRL瘤與移植垂體PRL瘤中PRL基因高表達的主要分子機制。 結(jié)果如下：(1)經(jīng)E2作用120天后，加藥組大鼠體重為184.33±18.27g，

4、下降至對照組大鼠體重429.67±41.78g的42.90％(P＜0.01)；對照組原位垂體和移植垂體的重量分別為13.08±2.47mg和3.42±0.99mg；加藥組原位垂體和移植垂體的重量分別為153.58±82.79mg和70.92±46.16mg，均較對照組增加達三倍以上(P＜0.01)。(2)RT-PCR檢測結(jié)果表明，E2作用120天后，原位和移植垂體PRL瘤組織中PRLmRNA的表達量均增加，其PRL/β-actin的灰度

5、值比值分別為1.5733±0.0427和1.5217±0.0402，與對照組原位和移植垂體組織的1.3433±0.0546和1.3017±0.0453相比均有顯著性差異(P＜0.01)；每組內(nèi)原位垂體組織PRLmRNA的表達量均高于移植垂體組織，但無顯著性差異。(3)測序結(jié)果顯示，與對照組原位垂體相比，原位垂體PRL瘤中上述5’遠端調(diào)控序列出現(xiàn)七處突變：-1886位點由C突變?yōu)镚，-1871～-1867由ACACA突變?yōu)镚，-1603～

6、-1602間插入G，-1376～-1375間插入TGTGTGTGTG片段，-1303位點T突變?yōu)锳，-1301位點A突變?yōu)門，-1269～-1252間缺失GTGTGTGTGTGTGTGT片段；而移植垂體催乳素瘤中PRL基因上述序列的突變明顯減少，有些突變位點消失，如-1871～-1867間無ACACA→G的突變，-1603～-1602間無插入G，-1303位點無T→A的突變，-1301位點無A→T的突變；個別突變雖仍然存在，但突變程度明

7、顯減弱，如-1376～-1375間只插入TG，-1269～-1252間只缺失GTGT。 上述結(jié)果表明，E2的長期作用不僅能夠誘發(fā)大鼠原位垂體形成PRL瘤，也能使移植于腎囊、遠離下丘腦的異體垂體同時形成PRL瘤，說明PRL瘤的病因除可繼發(fā)于下丘腦病變外，可以原發(fā)于腺垂體。但從測序的結(jié)果看，原位垂體PRL瘤和移植垂體PRL瘤的發(fā)生，其主要分子機制可能不盡一致，就本實驗研究分析，其原因可能是原位垂體PRL瘤的形成受E2和下丘腦的雙重調(diào)