耐水濕竹種SSR引物篩選及基于ISSRs標(biāo)記的耐水濕竹種親緣關(guān)系研究.pdf

1、竹類植物是禾本科（Gramineae）竹亞科（Bambusoideae）植物的總稱，是森林資源的重要構(gòu)成部分。我國南方地區(qū)的沿江灘涂地以及低濕地竹類資源較豐富，這些耐水濕竹類對(duì)于土地資源的利用、調(diào)整當(dāng)?shù)剞r(nóng)村產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)以及改善當(dāng)?shù)氐纳鷳B(tài)環(huán)境具有重要的作用，但一些竹種之間的親緣關(guān)系尚存在爭議，影響了一些竹種的科學(xué)和有效的利用。本論文主要對(duì)剛竹屬、苦竹屬和箬竹屬共3個(gè)屬11個(gè)耐水濕竹種進(jìn)行了兩方面的研究：（1）耐水濕竹種SSR-PCR反應(yīng)體系的

2、建立和優(yōu)化及SSR引物篩選；（2）基于ISSRs的耐水濕竹種的遺傳多樣性及親緣關(guān)系研究。
　　研究結(jié)果如下：
　　1．采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)和單因素分析方法建立和優(yōu)化了耐水濕竹種SSR-PCR反應(yīng)體系,篩選了SSR引物。反應(yīng)體系總體積為20.0μL：模板DNA(5-10 ng·μL-1)1.1μL、dNTP(10 mmol·L-1)0.44μL、正反向引物(10μmol·L-1)0.26μL、Mg2+(25 mmol·L-1)2.

3、0μL、Taq DNA聚合酶(5 U·μL-1)0.8μL、10×PCR緩沖液2.0μL、HPLC超純水13.14μL。 PCR擴(kuò)增程序?yàn)?94℃預(yù)變性3 min；44個(gè)循環(huán):94℃變性30 sec，54.0～56℃退火30 sec，72℃延伸60 sec；最后72℃延伸3min。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)顯示了SSR標(biāo)記在不同竹種間有限的通用性。
　　2．建立了耐水濕竹種ISSR-PCR最適反應(yīng)體系，利用優(yōu)化后的ISSR-PCR反應(yīng)體系篩選出了

4、11條多態(tài)性好、譜帶清晰、穩(wěn)定性好的引物，并運(yùn)用這些ISSR引物分析了耐水濕竹種的遺傳多樣性和親緣關(guān)系。結(jié)果顯示了這些耐水濕竹種有較高的遺傳多樣性，與其表型特征的多態(tài)性相符?；贒ice相似性系數(shù)的UPGMA聚類分析可將本研究中的11個(gè)竹種明顯地區(qū)分開來，并且將其清晰地歸入3個(gè)組，且與剛竹屬、苦竹屬和箬竹屬相對(duì)應(yīng)。聚類分析結(jié)果部分地支持了傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)分類結(jié)果，但顯示斑苦竹與剛竹屬親緣關(guān)系較箬竹更近。本研究還初步發(fā)現(xiàn)一些竹屬的ISSR特異