用膠原材料體外構(gòu)建心肌組織的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：采用膠原海綿為支架，以新生大鼠心肌細(xì)胞為種子細(xì)胞構(gòu)建工程化心肌組織。
　　內(nèi)容：提取鼠尾膠原，制備膠原海綿支架。新生大鼠心肌細(xì)胞的獲取研究。測(cè)出用BrDU抑制成纖維細(xì)胞增殖時(shí)所需的合適濃度。工程化心肌組織的構(gòu)建。
　　 方法：用凍干的方法將膠原溶液制成膠原海綿支架，進(jìn)行熱交聯(lián)處理，對(duì)其用掃描電鏡觀察。用胰酶和膠原酶消化法從1～2d新生大鼠的心肌組織中分離心肌細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)出不同的消化酶分離所得的心肌細(xì)胞數(shù)量。

2、用倒置顯微鏡觀察心肌的形態(tài)、搏動(dòng)狀態(tài)，對(duì)其進(jìn)行組織學(xué)檢查。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定成纖維細(xì)胞在BrDU作用下的增殖曲線。新生大鼠心肌細(xì)胞種植到膠原海綿支架上，對(duì)其進(jìn)行HE染色切片觀察和掃描電鏡觀察，將其與天然心肌組織作對(duì)比。
　　 結(jié)果：制得的膠原海綿支架具有多孔結(jié)構(gòu)，并且經(jīng)過(guò)熱交聯(lián)處理后，多孔結(jié)構(gòu)得到保持，同時(shí)降解速率顯著降低。用胰酶和膠原酶同時(shí)分離所得的心肌細(xì)胞數(shù)量較多，而且具有較好的活性，在培養(yǎng)的第3d開(kāi)始自發(fā)搏動(dòng)，以后相互連接成