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文檔簡介
1、本研究以肝癌作為研究對象,以轉(zhuǎn)錄因子Sp1為靶點,采用細胞學(xué)、分子生物學(xué)、實驗動物學(xué)等方法研究Sp1對肝癌細胞Huh-7及裸鼠荷瘤模型的影響及其機制、腫瘤靶向藥物的不同聯(lián)合對Sp1及其下游VEGF基因的影響及其機制。研究可分為三部分內(nèi)容:
1.構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子Sp1特異性的siRNA質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染細胞利用分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建Huh-7細胞轉(zhuǎn)錄因子Sp1的siRNA質(zhì)粒,經(jīng)測序后,通過HilyMax試劑轉(zhuǎn)染入Huh-7細胞,使Sp1
2、表達沉默,并篩選陽性克隆。
2.研究轉(zhuǎn)錄因子Sp1對Huh-7細胞及動物模型的影響通過使用siRNA技術(shù)使Sp1表達沉默后,利用CCK8試劑研究Sp1對Huh-7體外細胞增殖的影響。與對照組比較,細胞培養(yǎng)24h之后,實驗組有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。通過動物荷瘤模型實驗,使用體內(nèi)生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀察,瘤體生長受到抑制(P<0.05)。
3.研究不同靶向藥物的組合對轉(zhuǎn)錄因子Sp1及其下游基因的影響通過使用CH
3、ML、MithramycinA和Avastin三種藥物,并設(shè)計不同的藥物組合,體內(nèi)生物發(fā)光成像系統(tǒng)觀察和使用Western Blot分析,研究藥物對動物模型中Sp1及其下游VEGF基因的影響。結(jié)果表明,三者的聯(lián)用效果最佳(P<0.05)。
結(jié)論:
通過構(gòu)建Sp1 siRNA質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)染入Huh-7細胞,可使Sp1表達沉默。在體內(nèi)外的實驗中可得出Sp1的表達與腫瘤增殖情況成正相關(guān)的結(jié)論。通過不同藥物組合的干預(yù),
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