旋毛蟲Ts87重組蛋白黏膜免疫誘導(dǎo)的小鼠保護力的研究.pdf

1、黏膜免疫系統(tǒng)是由分布于呼吸道、胃腸道、泌尿生殖道和乳腺黏膜內(nèi)的淋巴組織組成的，占據(jù)了機體淋巴組織的大部分。機體95﹪以上感染發(fā)生在黏膜部位，防治黏膜感染在人類健康中占舉足輕重的地位，然而傳統(tǒng)的疫苗接種，如皮下注射等，不能有效誘導(dǎo)黏膜部位的免疫應(yīng)答，只有從黏膜部位接種疫苗才能誘導(dǎo)黏膜免疫應(yīng)答。近年來，隨著人們對黏膜免疫的重視以及相關(guān)理論和技術(shù)的不斷發(fā)展，黏膜疫苗的開發(fā)成為了當今免疫學的研究熱點，因為黏膜疫苗符合原位免疫設(shè)計，即在感染的起始

2、階段起到預(yù)防目的旋毛蟲的自然感染途徑是經(jīng)口感染，感染后旋毛蟲幼蟲囊包在胃液及腸液作用下，幼蟲自囊包逸出，并鉆入十二指腸及空腸上段的腸黏膜中進行發(fā)育和繁殖，產(chǎn)于腸黏膜內(nèi)的新生幼蟲侵入局部淋巴結(jié)或小靜脈，隨淋巴或血循環(huán)播散至全身致病。所以研究旋毛蟲黏膜疫苗的關(guān)鍵是能在感染的起始部位腸道誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，來阻止病原體的入侵。目前，國內(nèi)外關(guān)于旋毛蟲黏膜疫苗的研究主要集中在使用全蟲抗原作為免疫原，但這些抗原來源有限，且易引發(fā)非特異性反應(yīng)。重組抗原易于

3、制備，安全性好，迄今為止，有關(guān)重組抗原用于旋毛蟲黏膜免疫的研究尚未見報道。本研究利用旋毛蟲Ts87重組抗原經(jīng)黏膜途徑免疫小鼠，觀察其能否誘導(dǎo)腸道黏膜免疫應(yīng)答，即能否在感染的起始階段起到抗旋毛蟲的作用，并初步探討其作用機制，以期制備抗旋毛蟲病的黏膜疫苗。 選擇合適的佐劑和從哪個黏膜部位引入抗原是成功研制黏膜疫苗首先要解決的問題。因此，本研究首先探討Ts87重組蛋白分別聯(lián)合不同佐劑(氫氧化鋁，Al(OH)3；霍亂毒素B亞單位，CT-

4、B； IMS1312；)經(jīng)口灌胃免疫小鼠誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫保護作用，觀察并比較其保護效果，從中選出一種較好的佐劑。150只NIH小鼠隨機分成分5組：CT-B+Ts87蛋白組、AI(OH)<,3>+Ts87蛋白組、IMSl312+Ts87蛋白組、單純Ts87蛋白組和對照組，灌胃免疫，間隔1周共免疫3次。末次免疫后第7d用400條旋毛蟲感染期幼蟲攻擊，比較各組小鼠腸道成蟲數(shù)、雌蟲生殖力和肌幼蟲數(shù)，并收集腸黏液和血清，檢測特異性sIgA、IgG抗

5、體水平。 結(jié)果顯示：CT-B+Ts87蛋白組成蟲減蟲率、新生蚴減蟲率和肌幼蟲減蟲率均比其它組高，腸黏液特異性sIgA和血清特異性IgG抗體水平也明顯高于其它組。這說明CT-B不僅能誘導(dǎo)腸道黏膜免疫反應(yīng)，而且能誘導(dǎo)全身免疫反應(yīng)，并能有效促進蟲體排出，是輔助Ts87重組抗原發(fā)揮作用的良好黏膜佐劑。其次，比較Ts87重組抗原經(jīng)不同的黏膜免疫途徑接種產(chǎn)生的免疫保護效果。 本研究選擇了經(jīng)口和滴鼻兩種最常見的黏膜免疫途徑進行實驗，以

6、確定哪一種途徑通過共同黏膜免疫系統(tǒng)(CMIS)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答更有效。CT-B聯(lián)合Ts87重組蛋白分別用灌胃和滴鼻兩種途徑免疫小鼠，比較各組小鼠腸道成蟲數(shù)、雌蟲生殖力和肌幼蟲數(shù)；并比較各組小鼠鼻腔沖洗液、腸黏液、血清中特異性抗體水平(slgA、IgG、IgGl、IgG2a)。 結(jié)果顯示：兩種途徑都能誘導(dǎo)產(chǎn)生局部黏膜免疫反應(yīng)(slgA)和全身免疫反應(yīng)(IgG)，對腸道成蟲排出，雌蟲生殖力降低均有顯著作用，肌幼蟲數(shù)也明顯減少。其中經(jīng)口

7、服途徑接種疫苗，在腸黏膜有很強的免疫反應(yīng)(產(chǎn)生slgA)出現(xiàn)，而鼻腔無明顯的免疫反應(yīng)；而滴鼻免疫后除了在鼻腔有免疫反應(yīng)(產(chǎn)生slgA)出現(xiàn)外，腸道也有明顯的免疫反應(yīng)，并且滴鼻免疫可以顯著降低免疫原的用量。這提示滴鼻免疫可能是一種更有效、更安全的免疫途徑。 為了進一步探討免疫原誘導(dǎo)產(chǎn)生保護作用的機制，本實驗選用CT-B聯(lián)合Ts87重組蛋白經(jīng)口接種，觀察小鼠腸黏膜形態(tài)變化、特異性sIgA抗體水平變化與蟲體排出之間的相互關(guān)系。實驗分4

8、組：免疫組(CT-B+Ts87)、佐劑組(CT-B)、蛋白組(Ts87)和對照組(生理鹽水)。各組小鼠于0、14、21d灌胃免疫。末次免疫后第7 d用400條旋毛蟲感染期幼蟲攻擊，在攻擊前和攻擊后第7、14、28、42 d，各取1 cm左右腸段固定、石蠟包埋、切片染色；并收集腸黏液和血清檢測特異性slgA、IgG、IgGl、IgG2a，抗體；同時比較各組小鼠腸道成蟲數(shù)、雌蟲生殖力和肌幼蟲數(shù)。 結(jié)果顯示：小鼠經(jīng)口接種CT-B+Ts

9、87免疫原后，腸道黏膜及黏膜下層單核細胞和漿細胞明顯增多，腸道特異性sIgA水平顯著升高；攻擊感染后雖然小鼠腸黏膜充血，但上皮細胞基本完整，攻擊后第7 d腸道內(nèi)成蟲數(shù)比對照組、佐劑組或蛋白組明顯減少，第14 d全部排出。對照組、佐劑組或蛋白組小鼠攻擊感染后，腸黏膜可見糜爛，上皮細胞有壞死脫落，小腸絨毛橫斷；腸道特異性sIgA水平?jīng)]有明顯升高；攻擊后第14 d腸道還有少量成蟲未排出。這說明腸道黏膜免疫應(yīng)答激活產(chǎn)生的特異性sIgA，對促進排