Smad7參與腫瘤TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制的研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文Smad7參與腫瘤TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制的研究姓名：周欣申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（消化病學(xué)）指導(dǎo)教師：李定國2001.4.1fRT—PCR分析結(jié)果顯示，LOVO細(xì)胞Smad7mRNA表達(dá)最強(qiáng)，k川K562細(xì)胞最弱。TGF—B；與腫瘤細(xì)胞共育可以誘導(dǎo)Smad7mRNA自j表達(dá)，二三種腫瘤細(xì)胞株的Smad7mRNA表達(dá)在刺激15小時(shí)后達(dá)到高峰。我們注意到，當(dāng)刺激時(shí)間達(dá)到24小時(shí)，SMMC772l細(xì)胞自JSma

2、d7mRNA表達(dá)仍持續(xù)升高，而其它兩株則已降至較低水平。Westernblot方法檢測(cè)Smad7蛋白的結(jié)果顯示，蛋F的表達(dá)情；，：與tuRNA相近，三種細(xì)胞株的Smad7蛋白表達(dá)量不同，LOVO約胞表達(dá)最強(qiáng)，SMMC772l細(xì)胞其次，K562細(xì)胞最弱。經(jīng)與TGF。D共育后對(duì)各細(xì)胞組內(nèi)Smad7蛋白的影響與mRNA的變化趨勢(shì)夫致相同。通過免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)更直觀地展示Smad7蛋白的胞內(nèi)定位。三種腫瘤細(xì)胞株Smad7蛋白的胞內(nèi)定位有所不同：

3、LOVO細(xì)胞Smad7籃白的表達(dá)主要位于胞核；給予外源性TGF—D，刺激后，Smad7蛋：從胞核向胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)移，以完成其作為I型受體絲氨酸／蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域拮抗物的生物功能。與LOVO細(xì)胞不同的是：SMMC772l與K562細(xì)胞株在與TGFB共育前后Smad7蛋白均主要定位于胞漿區(qū)，胞核則鮮見表達(dá)。與TGFD，共育15小時(shí)后，SMMC7721細(xì)胞Smad7蛋白分布于核周區(qū)，形成以核為中心的環(huán)戒狀結(jié)構(gòu)，共育24小時(shí)后該環(huán)戒狀結(jié)構(gòu)彌散，與TG

4、F—p、共育后K562細(xì)胞株即出現(xiàn)陽性顆粒濃聚并粘附于胞核表面的現(xiàn)象。研究顯示TGFD，并未顯著改變SMMC772l及K562細(xì)胞的Smad蛋白胞內(nèi)定位，提示Smad7蛋自主要在胞漿內(nèi)實(shí)施其拮抗功能。綜』二所述，Smad7mRNA存三種腫瘤細(xì)胞株中的表達(dá)強(qiáng)度不同，作為早期即時(shí)反應(yīng)的基因，Smad7的表達(dá)可由TGFpj誘導(dǎo)，但值得往意的是其表達(dá)的增強(qiáng)為‘一過性及短時(shí)期的。Smad7蛋白的表達(dá)與其mRNA的表達(dá)一致，提示Smad7的表達(dá)及其