結(jié)直腸癌中TLR4的表達(dá)及其與FasL、EGFR的關(guān)系.pdf

1、背景及目的:
　　 結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展涉及多種基因的異常改變。已有研究表明，慢性腸道炎癥增加了結(jié)直腸癌發(fā)生進(jìn)展的危險(xiǎn)性，Toll樣受體4(toll-likereceptor4，TLR4)在腸道慢性炎癥中發(fā)揮關(guān)鍵作用，TLR4可以促進(jìn)結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展，但其機(jī)制尚不完全清楚。另外，我們前期研究發(fā)現(xiàn):結(jié)直腸癌中Fas配體(Fasligand，F(xiàn)asL)表達(dá)明顯升高，可以誘導(dǎo)機(jī)體淋巴細(xì)胞凋亡，反擊機(jī)體免疫體統(tǒng)。表皮生長(zhǎng)因子受體(ep

2、idermalgrowthfactorreceptor，EGFR)在結(jié)直腸癌中表達(dá)升高，可以促進(jìn)結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。本文擬通過觀察TLR4、FasL和EGFR在結(jié)直腸癌和正常大腸組織中的表達(dá)情況，分析TLR4表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，判斷其臨床意義和預(yù)后，分析TLR4表達(dá)與FasL和EGFR表達(dá)的關(guān)系，研究TLR4促進(jìn)結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)2007年至2011年間

3、58例經(jīng)手術(shù)切除后且經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)腸癌或者直腸癌的標(biāo)本和25例正常大腸組織中TLR4、FasL和EGFR的表達(dá)。所有患者臨床資料完整，并且術(shù)前均未接受過化療、放療或免疫治療。58例患者中，男38例，女20例，22～83歲，中位年齡61歲;結(jié)腸癌56例，直腸癌2例;高分化9例，中分化34例，低分化15例;Duke's分期:A期14例，B期14例，C期14例，D期16例。25例人正常大腸組織標(biāo)本均由結(jié)腸鏡活檢取得。TLR4單克隆抗體的工作濃

4、度為1∶300，F(xiàn)asL多克隆抗體和EGFR單克隆抗體的工作濃度均為1∶400，其余步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，選用磷酸鹽緩沖液替代上述抗體做陰性對(duì)照。通過Spearman's等級(jí)相關(guān)分析，探討TLR4與FasL或EGFR表達(dá)的關(guān)系。通過x2檢驗(yàn)分析TLR4在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.TLR4、FasL和EGFR在結(jié)直腸癌及正常大腸組織中的表達(dá)情況:TLR4表達(dá)主要定位于結(jié)

5、直腸癌細(xì)胞和正常腸粘膜細(xì)胞的胞漿和胞膜，胞核無表達(dá)，呈黃色顆?；驁F(tuán)塊。大部分正常腸粘膜細(xì)胞呈陰性表達(dá)，少數(shù)陽性表達(dá)，呈淡黃色顆粒。TLR4在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)陽性率為59％(34/58)，顯著高于其在正常大腸粘膜組織中的表達(dá)陽性率20％(5/25)(x2=10.461，P＜0.01)。FasL和EGFR主要在結(jié)直腸癌細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜表達(dá)，細(xì)胞核內(nèi)未見表達(dá)。EGFR偶見在結(jié)直腸癌間質(zhì)中表達(dá)。陽性表達(dá)呈黃色顆?；驁F(tuán)塊。FasL和EGFR在

6、結(jié)直腸癌中的表達(dá)陽性率分別為71％和83％，均明顯高于在正常大腸組織中的表達(dá)陽性率（分別為22％和31％），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.018，P＜0.05;x2=3.708，P＜0.05)。
　　 2.通過分析TLR4在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系顯示，TLR4的表達(dá)與結(jié)直腸癌患者的年齡、性別、結(jié)直腸癌的分化程度和局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移不顯著相關(guān)，TLR4的表達(dá)與結(jié)直腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(x2=4.063，P＜0.

7、05)。
　　 3.通過分析TLR4表達(dá)與FasL、EGFR表達(dá)的關(guān)系得出，TLR4和FasL表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.249，P＜0.01)，而且在同一樣本連續(xù)切片中，TLR4表達(dá)強(qiáng)的部位多伴有FasL的強(qiáng)表達(dá)，TLR4表達(dá)弱的部位也常伴隨FasL的弱表達(dá)。TLR4與EGFR的表達(dá)不具有相關(guān)性(r=0.345，P＞0.05)，并且在同一樣本連續(xù)切片中，TLR4和EGFR的表達(dá)部位也基本不一致。
　　 結(jié)論:
　　

8、 1.TLR4表達(dá)與結(jié)直腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示TLR4可能促進(jìn)結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移。該指標(biāo)可以作為判斷結(jié)直腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的依據(jù)之一。
　　 2.TLR4在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與FasL具有正相關(guān)性，TLR4的表達(dá)隨FasL的表達(dá)增強(qiáng)而增強(qiáng)。結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)TLR4可能通過調(diào)控FasL的表達(dá)，參與結(jié)直腸癌的免疫反擊，促進(jìn)結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)中TLR4在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)與EGFR的表達(dá)不具有相關(guān)性。TLR4