壓力性潰瘍中MMP-2、9的表達(dá)及其相關(guān)研究.pdf

1、目的： 檢測(cè)MMP-2、9在波浪床組及對(duì)照組PU患者傷口滲液及組織中的表達(dá)，并結(jié)合患者臨床療效進(jìn)行分析，以期揭示MMP-2、9在PU不同時(shí)期的表達(dá)及其與PU愈合的關(guān)系，同時(shí)觀察波浪床綜合療法的臨床效果；原代培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞，進(jìn)行藥物干預(yù)，觀察慶大霉素、雙氧水及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)成纖維細(xì)胞及其MMP-2、9表達(dá)的影響，為PU的治療提供更多的理論依據(jù)。 方法： 本實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行。第一部分：收集2004年6月～

2、2005年12月入住中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院急診觀察區(qū)、急診重癥監(jiān)護(hù)病房、內(nèi)科重癥監(jiān)護(hù)病房、神經(jīng)內(nèi)科、骨科Ⅲ-Ⅳ期骶部PU患者24例，分為波浪床組及對(duì)照組。采用明膠酶譜及RT-PCR方法檢測(cè)兩組患者傷口滲液中MMP-2、9蛋白水平及組織中MMP-2mRNA的表達(dá)，研究隨著PU的愈合，MMP-2、9表達(dá)水平的變化情況，以了解MMP-2、9與PU愈合的關(guān)系及波浪床綜合療法治療PU的效果。第二部分：原代培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞，繪制其生長(zhǎng)曲線，通過MTT

3、比色方法，檢測(cè)不同濃度慶大霉素、雙氧水及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，采用明膠酶譜及RT-PCR方法分別檢測(cè)與有效濃度藥物共孵育24h后細(xì)胞上清中MMP-2、9蛋白及細(xì)胞中MMP-2mRNA的表達(dá)，以期指導(dǎo)PU的臨床治療。 結(jié)果： 1、PushTool評(píng)分的變化：兩組患者分別于第1、7和21天行PushTool評(píng)分，評(píng)分結(jié)果隨治療時(shí)間呈逐漸下降趨勢(shì)。其中波浪床組患者第1、7、21天評(píng)分結(jié)果兩兩相比均

4、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，第7天時(shí)評(píng)分結(jié)果已較第1天明顯下降。對(duì)照組患者第1天與第7天評(píng)分結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，第1、7天與第21天評(píng)分結(jié)果相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，說明對(duì)照組患者第21天時(shí)評(píng)分結(jié)果才出現(xiàn)明顯下降。兩組患者評(píng)分結(jié)果比較，第1、7天差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而第21天時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明波浪床組第21天時(shí)評(píng)分結(jié)果較對(duì)照組明顯下降。 2、分析PU患者傷口滲液中

5、MMP-2、9蛋白與相應(yīng)PushTool評(píng)分的相關(guān)性：取兩組患者第1、7、21天MMP-2、9比活結(jié)果與相應(yīng)PushTool評(píng)分結(jié)果作散點(diǎn)圖，發(fā)現(xiàn)隨著評(píng)分結(jié)果的下降，MMP-2、9比活結(jié)果也逐漸下降，兩者呈線性正相關(guān)，計(jì)算Pearson相關(guān)系數(shù)(r)分別為0.842和0.866，P=0。說明PU患者傷口滲液中MMP-2、9比活與PushTool評(píng)分呈高度正相關(guān)。 3、MMP-2、9在波浪床及對(duì)照組不同時(shí)期表達(dá)的差異：MMP-2、

6、9比活隨治療時(shí)間而逐漸下降。波浪床組患者第1、7、21天MMP-2、9比活兩兩相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明第7天時(shí)，MMP-2、9比活較第1天已有明顯下降。對(duì)照組第1天MMP-2、9比活與第7天相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而第1、7天與第21天相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明對(duì)照組在第21天時(shí)MMP-2、9比活才有明顯下降。兩組患者M(jìn)MP-2、9比活結(jié)果第1天相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，第7、

7、21天時(shí)兩組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明與對(duì)照組相比，波浪床組MMP-2、9比活在第7天時(shí)有明顯下降。 4、波浪床及對(duì)照組PU患者創(chuàng)緣組織MMP-2mRNA的表達(dá)情況：波浪床組PU患者第1天MMP-2mRNA表達(dá)水平(MMP-2/β-actin)為1.43±0.20，第21天為0.43±0.11；兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。對(duì)照組第1天為1.33±0.17，第21天為0.61±0.20；兩者相比

8、差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。表明兩組患者M(jìn)MP-2mRNA表達(dá)水平在第21天時(shí)均有明顯下降。兩組患者第1天MMP-2mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，但第21天時(shí)兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，說明與對(duì)照組相比，波浪床組MMP-2mRNA表達(dá)水平在第21天時(shí)明顯下降。 5、慶大霉素、雙氧水及bFGF對(duì)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響：經(jīng)MTT比色法，得知慶大霉素、雙氧水抑制成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)，而bFGF則

9、促進(jìn)成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。慶大霉素、雙氧水及bFGF有效濃度分別為：0.8mmol/l、0.1mmol/1和5ng/ml。 6、慶大霉素、雙氧水及bFGF對(duì)MMP-2、9蛋白表達(dá)的影響：與對(duì)照組相比，有效濃度的慶大霉素、雙氧水與成纖維細(xì)胞共孵育24h后細(xì)胞上清液中MMP-2、9活性明顯減弱，MMP-9條帶消失、MMP-2比活分別下降67.6％和83.5％，而bFGF與成纖維細(xì)胞共孵育24h后，細(xì)胞上清液中MMP-2無明顯變化僅上調(diào)1

10、.65％，MMP-9上調(diào)了19.8％。 7、成纖維細(xì)胞MMP-2mRNA水平的變化：與對(duì)照組相比，與慶大霉素、雙氧水共孵育后細(xì)胞MMP-2mRNA表達(dá)水平有所下降，MMP-2mRNA表達(dá)水平(MMP-2/β-actin)分別下調(diào)15.75％和36.5％，而bFGF組僅下降1.3％。 結(jié)論： 1、MMP-2、9可以作為監(jiān)測(cè)PU愈合情況的生化標(biāo)記物，提示MMP-2、9可能成為治療PU的生物靶點(diǎn)。 2、波浪床綜