ERK-1-2在移植靜脈中的表達(dá)及其與MMP-2，MMP-9之間變化關(guān)系的研究.pdf

1、目的：研究細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK-1/2）, MMP-2，MMP-9在自體移植靜脈中的表達(dá)及ERK-1/2與MMP-2，MMP-9之間變化的相互關(guān)系。
　　方法：采用3+0.5 kg成年健康大白兔45只，隨機(jī)分為正常組3只（Control組），手術(shù)組42只。手術(shù)組建立自體頸外靜脈翻轉(zhuǎn)行頸動(dòng)脈轉(zhuǎn)流手術(shù)模型，其中一組是將頸外靜脈置于含0.8％DMSO的緩沖液中培養(yǎng)30min后吻合在頸總動(dòng)脈上（VG組），而另一組是將靜脈置于含80μ

2、mol/l U0126的緩沖液中培養(yǎng)30min后再吻合到頸總動(dòng)脈上（VG/UO組）。分別與術(shù)后1h,3h,1d,3d,7d,14d,28d犧牲大白兔，獲取實(shí)驗(yàn)段血管，正常組直接取頸外靜脈。采用HE染色觀察血管組織以及細(xì)胞的結(jié)構(gòu)變化、采用 Western-Blot方法檢測(cè)ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-9,MMP-2蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、動(dòng)物模型建立成功,移植靜脈血流通暢
　　2、HE染

3、色見：術(shù)后3d VG組移植靜脈橋較VG/UO、control組有明顯內(nèi)皮損傷，7d有新生內(nèi)膜形成，平滑肌細(xì)胞增生，14d、28d新生內(nèi)膜進(jìn)一步增厚，平滑肌細(xì)胞變性，表型改變，有明顯的平滑肌向內(nèi)皮側(cè)遷移，而VG/UO組內(nèi)膜較完整，未見明顯的平滑肌細(xì)胞向內(nèi)皮側(cè)遷移。
　　3、Western blot檢測(cè)ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-2,MMP-9結(jié)果
　　3.1、P-ERK-1/2的表達(dá)：（a）VG組靜脈

4、移植后30min，P-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，與正常靜脈比較差異有顯著性(P<0．05)，在移植3h和3d表達(dá)達(dá)高峰，呈現(xiàn)雙峰現(xiàn)象，與其余時(shí)點(diǎn)比較差異有顯著性(P<0．01)，28d后恢復(fù)接近正常水平。（b）VG/UO組移植靜脈P-ERK1/2蛋白表達(dá)明顯減少，術(shù)后未見明顯的活化高峰，在術(shù)后28d后僅有極少量的表達(dá)，與Control組靜脈P-ERK1/2蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.2、 PCNA蛋白的

5、表達(dá)：（a）VG組靜脈移植術(shù)后3h開始有明顯的蛋白表達(dá)，隨后表達(dá)逐漸增多，與Control組靜脈PCNA蛋白比較差異有顯著性（P<0.05）, VG組PCNA與P-ERK1/2表達(dá)呈正相關(guān)(P<0．01)。（b）VG/UO組PCNA蛋白表達(dá)明顯下調(diào)，Control組靜脈PCNA蛋白比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）與在術(shù)后28d表達(dá)基本上消失.
　　3.2、MMP-9蛋白的表達(dá)：（a）Control組移植靜脈MMP-9蛋白有少量

6、表達(dá)。（b）VG組移植靜脈MMP-9蛋白在移植術(shù)后3h表達(dá)就開始增加，與Control組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），在移植后1d達(dá)到高峰，與本組其余時(shí)點(diǎn)比較差異顯著（P<0.05），表達(dá)隨后逐漸降低，在28d降至基礎(chǔ)水平。（c）VG/UO組移植靜脈中MMP-9蛋白的表達(dá)明顯下調(diào)，僅在術(shù)后3d有少量表達(dá)，也未見明顯的高峰發(fā)現(xiàn)，在14d MMP-9蛋白的表達(dá)幾乎消失，全時(shí)點(diǎn)表達(dá)與Control組比較差異無顯著性（P>0.05），V

7、G組與VG/UO組移植靜脈中MMP-9蛋白在相同時(shí)段的表達(dá)有明顯差異（P<0.05）。
　　3.4、MMP-2的表達(dá)：（a）Control組移植靜脈MMP-2蛋白幾乎沒有表達(dá)（b）VG組移植靜脈MMP-2蛋白表達(dá)從術(shù)后1d開始增加，增加呈時(shí)間依賴性，增加一直持續(xù)至術(shù)后28d。（c）VG/UO組MMP-2蛋白表達(dá)明顯減少，僅在術(shù)后3d開始有少量表達(dá)，至28d基本消失，與control組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）.VG組和VG/

8、UO組MMP-2蛋白表達(dá)在相同時(shí)段比較有明顯差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　?。?）ERK-1/2的激化可能是內(nèi)膜增生的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，通過抑制ERK1/2的活化可以抑制內(nèi)膜增生，阻止移植血管再狹窄；
　?。?）血管重塑使移植靜脈發(fā)生了形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能的動(dòng)態(tài)變化，其結(jié)構(gòu)變化包括細(xì)胞增殖、死亡、遷移以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成和降解，MMP-2， MMP-9的活化參與血管再狹窄過程；
　?。?）ERK-1/2活化介