羧乙基殼聚糖-納米羥基磷灰石復(fù)合材料的制備與組織工程氣管軟骨構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 合成一種新型的組織工程支架材料—羧乙基殼聚糖/納米羥基磷灰石(NCECS/n-HA)復(fù)合材料，并探討兔氣管軟骨細(xì)胞與NCECS/n-HA材料的相容性，及構(gòu)建組織工程氣管軟骨的可行性。
　　 方法：
　　 (1)通過(guò)傅立葉紅外光譜儀(FTIR)檢測(cè)復(fù)合物材料中官能團(tuán)的改變。(2)通過(guò)X射線衍射分析(XRD)對(duì)材料晶體結(jié)構(gòu)的改變做出判斷。(3)通過(guò)掃描電鏡分析n-HA在NCECS中的分散情況。(4)干態(tài)

2、樣本使用WDW-5型拉伸測(cè)試機(jī)。濕態(tài)樣本為固態(tài)樣本在PBS液中浸泡24h制成，使用低張力拉伸測(cè)試儀(FGC-0.2B)測(cè)試。記錄每組標(biāo)本的拉伸強(qiáng)度和最大伸張率。(5)從6個(gè)月大的大耳白兔取氣管軟骨片段，Ⅱ型膠原酶消化，將所獲得軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)。第3代軟骨細(xì)胞種植到NCECS/n-HA膜上，計(jì)算膜上的軟骨細(xì)胞2，6，12h細(xì)胞粘附率；(6)將第3代軟骨細(xì)胞分別種植于96孔板內(nèi)的NCECS/n-HA膜上，分別于1，3，5，7，9d取出，用M

3、TT法測(cè)定細(xì)胞增殖活性。并于第9d通過(guò)掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。(7)通過(guò)真空冷凍干燥法制得NCECS/n-HA泡沫支架。將第3代軟骨細(xì)胞種植于NCECS/n-HA三維泡沫支架上。細(xì)胞-支架復(fù)合物在裸鼠體內(nèi)培養(yǎng)90d，然后取出分別進(jìn)行HE染色、Ⅱ型膠原免疫組化染色和甲苯胺藍(lán)染色，觀察軟骨細(xì)胞基質(zhì)分泌情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)FTIR結(jié)果顯示NCECS中的羧基與n-HA分子發(fā)生了交互作用。(2)XRD分析結(jié)果顯示n-H

4、A與NCECS的混合并沒(méi)有影響二者的晶體結(jié)構(gòu)。(3)掃描電鏡分析結(jié)果顯示n-HA分子和NCECS之間可能形成某種分子交聯(lián)，使得n-HA分子可以很好地分散于NCECS溶液中。(4)力學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)n-HA的加入使得NCECS的機(jī)械性能下降，但是NCECS/n-HA復(fù)合物的機(jī)械性仍能符合組織工程支架材料的要求。(5)兔氣管軟骨在NCECS/n-HA膜上的12h黏附率為86.33％，與對(duì)照組相比，無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(6)MTT法示軟骨細(xì)胞在NCE