中草藥鎮(zhèn)痛活性的篩選和藥理學(xué)研究.pdf

1、本文采用小鼠醋酸扭體模型，以扭體抑制率為鎮(zhèn)痛活性評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)57種傳統(tǒng)中草藥和民間藥用植物進(jìn)行了鎮(zhèn)痛活性成分篩選，發(fā)現(xiàn)其中12種植物的粗提物具有較好的鎮(zhèn)痛活性(在粗提物劑量為1.0g·kg-1時(shí)小鼠醋酸扭體抑制率達(dá)70％或0.2g·kg-1時(shí)扭體抑制率達(dá)50％，視為有效)。 配合植化對(duì)地楓皮(IPT-HA006)、絡(luò)石藤(IPT-HA022)、紫珠葉(IPT-HA105)、紅毛走馬胎(IPT-HA122)、喜花草(IPT-HA1

2、23)、珍珠菜(IPT-HA151)、青骨藤(IPT-HA169)等7種植物進(jìn)行活性成分追蹤分離篩選，分離得到72個(gè)化合物，對(duì)其中的35個(gè)化合物進(jìn)行了鎮(zhèn)痛活性評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)結(jié)果為今后研究提供了線索。 在篩選過程中，發(fā)現(xiàn)鎮(zhèn)痛活性較好的粗提物其鎮(zhèn)痛成分除生物堿外，大部分來自皂甙類如樅木、絞骨藍(lán)、青骨藤、紅毛走馬胎等總皂甙。 為進(jìn)一步了解皂甙類的鎮(zhèn)痛活性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系，我們分析了樅木皂甙和紅毛走馬胎皂甙，發(fā)現(xiàn)連有三個(gè)糖的五環(huán)三萜皂甙

3、顯示的鎮(zhèn)痛活性較弱或沒有鎮(zhèn)痛活性；而連有四個(gè)糖的五環(huán)三萜皂甙顯示一定的鎮(zhèn)痛活性。經(jīng)水解所得的五環(huán)三萜皂甙元及它們所連的糖鏈顯示的鎮(zhèn)痛活性較弱或沒有鎮(zhèn)痛活性；同一五環(huán)三萜皂甙元因所連接的糖鏈不同，其鎮(zhèn)痛活性不同，鎮(zhèn)痛活性的強(qiáng)弱依次為甙元+雙糖鏈(3位、28位均有糖鏈，如走馬胎甙Fr5A)＞甙元+單糖鏈(3位或28位僅有一個(gè)糖鏈，如90-8)＞糖鏈(Sc1和Sc2)＞甙元(Ag1和Ag2)。因此從我們的實(shí)驗(yàn)中推測：皂甙所具有的鎮(zhèn)痛活性，可能

4、是來源于甙元和糖鏈結(jié)合的整體皂甙結(jié)構(gòu)。糖鏈的組成及排列可能決定其鎮(zhèn)痛活性的強(qiáng)弱，這一推測為我們對(duì)其結(jié)構(gòu)改造和修飾提供了依據(jù)。 通過分析篩選結(jié)果，我們確定對(duì)采自云南省麻栗坡縣豆豉店老君山的紅毛走馬胎(Ardisiamamillata)作為我們進(jìn)一步研究的對(duì)象。我們將紅毛走馬胎全株用50％乙醇進(jìn)行初提，所得的提取物IPT-HA-122Et50(1.0g/kg)在小鼠醋酸扭體模型上其鎮(zhèn)痛抑制率為98.1％。在活性跟蹤分離過程中，采用小

5、鼠醋酸扭體模型以扭體抑制率為活性追蹤指標(biāo)，確定正丁醇部位(122-NB)為紅毛走馬胎的鎮(zhèn)痛活性部位；對(duì)其活性部位進(jìn)行活性成分的跟蹤分離，依次得到紅毛走馬胎的活性段(122-NB-Fr5)和活性單體(走馬胎甙Fr5A)。根據(jù)相關(guān)的理化和波譜數(shù)據(jù)，對(duì)它進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析和鑒定，認(rèn)為走馬胎甙Fr5A屬五環(huán)三萜皂甙，該化合物結(jié)構(gòu)尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。 我們選用4種模型對(duì)走馬胎甙Fr5A進(jìn)行鎮(zhèn)痛活性評(píng)價(jià)，其中在小鼠醋酸扭體模型選擇二種給藥途徑(sc和

6、ig)，以不同劑量給藥，得到走馬胎甙Fr5Asc的ED50為4.17mg·kg-1和ig的ED5020.91mg·kg-1。在小鼠熱輻射熱甩尾模型上，走馬胎甙Fr5A50和100mg·kg-1顯示一定的鎮(zhèn)痛活性，在等同劑量下鎮(zhèn)痛活性強(qiáng)于延胡索乙素，并且強(qiáng)于1000mg·kg-1劑量的阿斯匹林和撲熱息痛。在小鼠熱板法模型上，走馬胎甙Fr5A未顯示明顯的鎮(zhèn)痛活性。在蜂毒致結(jié)腸炎痛模型上(本模型對(duì)抗炎鎮(zhèn)痛藥的研究較為重要)，本實(shí)驗(yàn)中分別ig給

7、予走馬胎甙Fr5A25mg·kg-1和50mg·kg-1，與對(duì)照組比較，對(duì)蜂毒引起的內(nèi)臟炎痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用，但兩個(gè)劑量組無明顯的差異。在抗炎模型上，走馬胎甙Fr5A對(duì)二甲苯致小鼠耳部水腫和角叉菜膠誘發(fā)大鼠足爪腫脹均有一定抑制作用。 本文還研究了走馬胎甙Fr5A對(duì)體內(nèi)外腫瘤細(xì)胞的影響，MTT法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明走馬胎甙Fr5A對(duì)K562(人紅白血病細(xì)胞株)的增殖有較強(qiáng)的抑制作用IC50為7.41μg·ml-1；流式細(xì)胞儀測定的結(jié)果顯

8、示走馬胎甙Fr5A在30μm對(duì)K562細(xì)胞周期的影響在SubG1期。在整體實(shí)驗(yàn)中，走馬胎甙Fr5A對(duì)小鼠移植性腫瘤(S180)的生長有一定的抑制作用。另MTT法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，走馬胎甙Fr5A對(duì)Kato-Ⅲ(人胃印戒癌細(xì)胞株)OVCA2780(人卵巢癌細(xì)胞株)的增殖也有一定的抑制作用，它們的IC50分別為36.33μg·ml-1(Kato-Ⅲ)、40.86μg·ml-1(OVCA2780)。我們只是對(duì)走馬胎甙Fr5A的抗腫瘤作了初步的探